Informatie

3.6: SIM Agar - Biologie


SIM-medium (sulfide, indol, motiliteit) is een voorbeeld van een multi-testmedium, dat wil zeggen dat het meer dan één aspect van het metabolisme van de bacterie tegelijk test. In dit geval de productie van waterstofsulfide, de vorming van indool en beweeglijkheid.

Procedure

  1. Verkrijg een diep SIM-medium.
  2. Steek met een entnaald het medium ongeveer 2/3 van de weg naar beneden en via dezelfde weg zo snel mogelijk met het aan u toegewezen organisme.
  3. Incubeer de buis gedurende ten minste 48 uur.
  4. Onderzoek uw buis na de incubatieperiode.

Interpretatie

Waterstofsulfide (H2S) productie wordt aangegeven door een zwarte kleur in het medium.

Indoolproductie wordt aangegeven door een rode ring op het oppervlak van de diepte na toevoeging van Kovac's reagens.

Motiliteit wordt aangegeven door het vermogen van het organisme om weg te 'waaien' van de streep. Of de hele buis kan troebel lijken in vergelijking met een niet-geïnoculeerde controle. Als het organisme niet-beweeglijk is, zal de groei alleen langs de steeklijn verschijnen.

Links: H2S Positief
Centrum: Indool Positief
Rechts: Motiliteit negatief


Vraag: Hoe wordt het ademhalingssysteem van in het water levende weekdieren gekarakteriseerd? Wat een adaptieve ademhalingsstructuur.

A: Klik om het antwoord te zien

Vraag: Bij paarden wordt de hoogte bepaald door onvolledige dominantie. De twee allelen zijn Lang (T) en kort (T').

A: Onvolledige dominantie is de toestand waarin geen van de allelen van een gen de expressie kan maskeren.

Vraag: Wat zijn de verschillende methoden van ongeslachtelijke voortplanting?

A: Aseksuele reproductie is het fenomeen van de productie van een nakomeling door een alleenstaande ouder zonder de .

Vraag: Welke anatomische veranderingen treden op tijdens een myocardinfarct (MI), en wat is/zijn het waarschijnlijke gevolg.

A: Myocardinfarct wordt ook wel een hartaanval genoemd. De hartspier raakt beschadigd als er .

Vraag: Wat is een voorbeeld van zoetwater platwormen? Vanwege die habitat wat is het fysiologische probleem tha.

A: Platwormen behoren tot de phylum Platyhelminthes. Voorbeelden zijn staartvinnen, planarians en lintwormen. .

Vraag: Wat is het Luria-Delbrück-fluctuatie-experiment?

A: Mutaties worden gedefinieerd als elke verandering in de nucleotidesequentie die ook het fenotype van de.

Vraag: Wat is de algemene chemische vergelijking van fotosynthese? Waarom laat die vergelijking niet duidelijk de .

A: Fotosynthese is het proces waarbij groene planten (autotrofen) CO2 in organische vorm (glucose) fixeren.

Vraag: Streptokokkenpathogenen die tot de geteste groepen behoren, vertonen ook andere belangrijke kenmerken.

A: Streptococcus behoort tot de klasse van bacillen en phylum Firmicutes. Streptococcus-soorten zijn responsi.

Vraag: Wat versta je onder dubbele bevruchting?

A: Bevruchting is het proces van fusie van mannelijke en vrouwelijke gameten om een ​​zygote te vormen. De zygote dan.


Beginsel

Tryptofaan wordt gehydrolyseerd door tryptofanase om drie mogelijke eindproducten indool, pyruvaat en ammoniak te produceren. De productie van indol wordt gedetecteerd door het reagens van Kovac of Ehrlich. Indool, indien aanwezig, combineert met het aldehyde in het reagens om a roze tot roodviolette chinoïdale verbinding (als benzaldehyde-reagens wordt gebruikt) of een blauwe tot groene kleur (als kaneelaldehyde-reagens wordt gebruikt). De afwezigheid van enzym resulteert in geen kleurproductie (d.w.z. indool-negatief). Indooltestreactie

Indooltest is een veelgebruikte biochemische test en helpt bij het differentiëren Enterobacteriën en andere geslachten.


Principe van indooltest

In de indooltest wordt de groei van bacteriën geïnduceerd in a trypton rijk medium. Sommige bacteriën bezitten een intracellulair enzym tryptofase dat resulteert in deaminering van tryptofaan in drie eindproducten, namelijk indool, pyrodruivenzuur en ammonium.

De hydrolyse van tryptofaan vindt plaats door de verwijdering van de amine (NH2) groep en de toevoeging van water. De toevoeging van Kovacs en spotreagens bevestigt indoolproductie in respectievelijk een conventionele buis en spotindol-methode.

De spot-indoolmethode maakt het gebruik van p-Dimethylaminocinnamaldehyde-reagens dat koppelt aan indol om een blauw gekleurd complex. Bij een conventionele methode koppelt Kovacs-reagens of 4(p)-dimethylaminobenzaldehyde aan indol om een roodgekleurde verbinding of rosindol.

Indooltestmedia

Indooltest gebruikt over het algemeen een enkel testmedium zoals "Tryptofaanbouillon” en een gecombineerde testmedia zoals “simkaart”. Door tryptofaanbouillon te gebruiken, konden we alleen onderscheid maken tussen de indool-positieve en indool-negatieve organismen.

In tegenstelling hiermee is SIM (Sulfide Indole Motility) een gecombineerd testmedium, dat de micro-organismen onderscheidt op basis van hun H2S productie, indool productie en beweeglijkheid.

De samenstelling van tryptonbouillon vereist:

  • Trypton: 10g
  • Natriumchloride: 5g
  • Gedistilleerd water: 1L
  • pH: 7.5 0.2 (bij 25 Graden Celsius)

De samenstelling van SIM-media vereist:

  • Trypton: 20g
  • Pepton: 6.1g
  • Agar: 3.5g
  • Fe (NH)2(DUS4)2.6H2O: 0.2g
  • nee2S2O3.5H2O: 0.2g
  • Gedistilleerd water: 1L
  • pH: 7,5 0,2 (bij 25 graden Celsius)

Om de bacteriecultuur in de testmedia te inoculeren, moeten we geïsoleerde kolonies selecteren uit een van de niet-selectief medium toegevoegd met een voldoende hoeveelheid tryptofaan.

Indooltestreagens

Indool Kovacs-reagens: Componenten van indool Kovacs-reagens om 100 ml van een oplossing te bereiden, zijn onder meer:

  • 4(p)-dimethylaminobenzaldehyde: 5 gram
  • Amylalcohol: 75 ml
  • Geconcentreerd zoutzuur: 25 ml
  • Gedistilleerd water: 100 ml

Indool spot reagens: Componenten van indoolspotreagens om 100 ml van een oplossing te bereiden, zijn onder meer:

  • (p)-Dimethylaminocinnamaldehyde: 1,0 gram
  • Geconcentreerd zoutzuur: 10,0 ml
  • Gedistilleerd water: 100 ml

Methoden en procedure

Twee veelgebruikte methoden onderscheiden de organismen op basis van indolproductie, namelijk:

Spot Indool-methode

Procedure: Het omvat de volgende stappen:

  1. Verzadig Whatman no.1 filtreerpapier met het spot-indoolreagens.
  2. Laat het een paar minuten drogen.
  3. Voeg een klein bacterieel inoculum toe via een houten applicator van een niet-selectief medium dat rijk is aan tryptofaan zoals bloedagar-media.
  4. Wrijf het inoculum of bereid een dunne bacteriële uitstrijkje over de reagens verzadigde zone.
  5. Observeer het filterpapier na 3-5 minuten voor het verschijnen van een blauwgekleurde zone.
Interpretatie van resultaten
  • Positief resultaat: Blauwgroene kleur verschijnt over het bacteriële uitstrijkje.
  • Negatief resultaat: Een filtreerpapier blijft kleurloos.

Beperkingen
  • Spot indol-test is een minder gevoelig methode.
  • Inoculum moet worden genomen van een geïsoleerde kolonie om de verspreiding van indol te voorkomen.
  • Een bacteriecultuur moet worden geïncubeerd aeroob.
  • Er moet een cultuur uit de glucosevrij medium, omdat het de indol snel kan afbreken.
  • Een inoculum geïsoleerd uit selectieve media zoals MacConkey's8217s-agar en eosine-methyleenblauw-agar kan foutieve resultaten opleveren.
  • Bacteriën geïsoleerd uit Mueller Hinton-agar kunnen tryptofaan afbreken door: zure hydrolyse van caseïne.
  • Zwakke indool-positieve bacterie zoals Cardiobacterium hominis kan met deze methode niet worden onderzocht.

Conventionele indoolmethode

Procedure: Het omvat de volgende stappen:

  1. Bereid tryptonbouillon voor door de benodigde reagentia nauwkeurig af te wegen.
  2. Nadat alle componenten in een gesteriliseerde erlenmeyer zijn toegevoegd, voegt u een geschikte hoeveelheid steriel water toe en autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 graden Celsius onder een druk van 15 psi.
  3. Giet na het autoclaveren 5 ml tryptonbouillon in elk reageerbuisje.
  4. Ent vervolgens bacteriële zuivere cultuur via de steriele entlus.
  5. Incubeer de reageerbuisjes minimaal 24 uur bij een temperatuur van 35 graden Celsius.
  6. Giet 0,5 ml Kovacs-reagens en observeer a rood gekleurd complex bovenop de alcohollaag.
Interpretatie van resultaten

Positief resultaat: Aan de bovenkant ontwikkelt zich een kersenrode kleur.
Negatief resultaat: Een medium vormt een kleurloze of gele verbinding.

Beperkingen
  • Een conventionele buismethode duurt veel tijd (minimaal 24 uur) om de resultaten te verstrekken.
  • Het kan geen onderscheid maken tussen de niet-fermentatieve en anaërobe bacteriën, waarvoor een Ehrlich-reagens fungeert als vervanging van Kovacs-reagens.
  • Tijdens een reactie wordt een verbinding “skatol” vormen die de interpretatie van het resultaat kunnen verdoezelen.
  • Clostridium-soorten indool snel breken en valse resultaten geven.

Belangrijke feiten

Indooltest onderscheidt organismen die tryptofanase-enzym bezitten van de organismen die ontbreken. Tryptofaanactiviteit veroorzaakt de afbraak van tryptofaan.

  • Bacteriën die tryptofaan kunnen afbreken tot indol, hebben het enzym tryptofaan en worden "Indool positieve bacteriën”. Voorbeelden van indool-positieve bacteriën zijn: Aeromonas hydrophila, Bacillus alvei, Escherichia coli, Klebsiella oxytoca enzovoort.
  • Weinig bacteriën missen het tryptofanase-enzym in hun intracellulaire ruimte en kunnen tryptofaan niet splitsen in indol en worden "Indool-negatieve bacteriën”. Voorbeelden van indol-negatieve bacteriën zijn: Proteus mirabilis, Pasteurella ureum, Bacillus sp, Enterobacter sp enzovoort.

Tryptofanase is een intracellulair enzym dat aanwezig is in sommige bacteriën en dat tryptofaan en water gebruikt als “Substraten" produceren "Producten” zoals indol, pyrodruivenzuur en ammonium. Het behoort tot de CC lyasen familie, die het tryptofaanmetabolisme vergemakkelijkt via pyridoxaalfosfaat en kaliumcofactoren.

Indool (primair product) is een aromatische heterocyclische verbinding, die ontstaat als gevolg van tryptofaanhydrolyse. De indoolproductie kan worden gevisualiseerd door toevoeging van een gekleurde oplossing zoals Kovacs-reagens (voor buismethode) en Spot-reagens (voor spotmethode).


Richtlijnen voor het verhogen van GPA

Er is geen vaste formule om iemands GPA te verhogen, en strategieën die voor de ene persoon werken, werken mogelijk niet voor de andere. Er zijn echter enkele algemene richtlijnen en studiegewoonten die nuttig kunnen zijn bij het verhogen van het GPA. De onderstaande richtlijnen zijn meestal anekdotisch en zijn niet bedoeld als faalveilige manieren om iemands GPA te verhogen, maar zijn over het algemeen goede gewoonten die positieve effecten kunnen hebben op het leren, wat op zijn beurt de GPA kan verhogen.

Actief deelnemen aan lessen:

De lessen worden waarschijnlijk betaald door een student of hun ouder, en het niet bijwonen van lessen is zowel een financieel verlies als een verlies in potentieel onderwijs. Hoewel een student kan besluiten dat het bijwonen van een bepaalde les niet bevorderlijk is voor hun leren, of geen goed gebruik van hun tijd is, zelfs als de professor grotendeels ineffectief is, is er meestal waardevolle informatie die kan worden verkregen door simpelweg naar de les te gaan. Het niet bijwonen van de les kan bijvoorbeeld een negatief effect hebben op het GPA van een student als de student om wat voor reden dan ook informatie mist over een wijziging in examenlocatie of -materiaal.

Bovendien, hoewel het waar kan zijn dat professoren grotendeels aantekeningen herhalen in de klas die vaak later op een website worden geplaatst, kan het overslaan van lessen leiden tot gemiste kansen. Vragen van leerlingen in de klas, evenals de uitleg die daarop kan volgen, kunnen schijnbaar onbeduidende stukjes informatie opleveren die in feite een groot verschil kunnen maken bij toetsen. Dit komt omdat interactie met de professor en andere studenten iemands diepgaande kennis over een onderwerp kan vergroten, of de kleine tip kan geven die nodig is om het begrip van een student van een onderwerp te verstevigen.

Bovendien kan het bijwonen van de les, vooral als de klas kleiner is, de professor in staat stellen een naam, een gezicht en een cijfer te koppelen, vooral als de student actief deelneemt. Hoogleraren die attente en betrokken studenten zien, zijn meer geneigd begrip te hebben voor mogelijke problemen die zich kunnen voordoen, zoals noodsituaties die leiden tot gemiste deadlines. Daarnaast is het waarschijnlijker dat actieve deelname de geest van een student met betrekking tot het onderwerp aanspreekt dan het lezen van online notities of een leerboek, en onduidelijkheden kunnen ook ter plaatse worden opgehelderd. Deze kunnen op hun beurt van invloed zijn op iemands cijfer en algehele GPA.

Planning:

Iedere leerling heeft zijn of haar eigen leerstijl. Sommigen werken graag uren achter elkaar om een ​​opdracht te voltooien, terwijl anderen veel pauzes nemen. Er is geen ideale strategie, en hoe een persoon leren benadert, is sterk afhankelijk van de leerstijl, evenals het volgen van een studiestrategie die aansluit bij hun schema en wensen. De methode die de waarde van de bestede tijd maximaliseert, is waarschijnlijk het meest effectief voor het verbeteren van leren, en vervolgens GPA.

De organisatie van het werk dat gedaan moet worden, evenals het maken van aantekeningen is ook belangrijk. Het is net zo belangrijk om relevante informatie te kunnen vinden als om aantekeningen te maken in de klas. Aantekeningen zijn het meest waardevol als ze kunnen worden gebruikt als aanvulling op het leren. Hoogleraren presenteren tijdens een college grote hoeveelheden informatie, die een student misschien niet allemaal tijd heeft om te verwerken. Het is belangrijk om te oefenen met het maken van aantekeningen op een manier die de student in staat stelt terug te kijken en de informatie te leren (of op te zoeken).

Timemanagement is ook een belangrijk aspect van planning. Er zijn maar 24 uur in een dag, die een mens niet allemaal effectief kan gebruiken. Hoewel leren belangrijk is, kan het volgen van meer cursussen of activiteiten dan een persoon aankan, nadelig zijn voor zowel het leren als het gemiddelde GPA. Zodra alle cursussen zijn geselecteerd, kunnen budgettering en planning van de tijd voor elke cursus helpen om de hoeveelheid werk en tijd die nodig is in perspectief te plaatsen. Hoewel de hoeveelheid werk die nodig is voor een aantal cursussen in eerste instantie ontmoedigend kan lijken, kan het plannen van hoe en wanneer het werk voor elke cursus moet worden aangepakt, stress helpen verminderen en de efficiëntie verbeteren zodra het werk is gekwantificeerd (of kan iemand helpen beseffen dat ze meer dan ze aankunnen).

Het regelmatig herzien van werk, in termen van studeren, is een ander aspect van timemanagement. Tegen de tijd van het eindexamen wordt een aanzienlijke hoeveelheid informatie in een cursus behandeld, en het is vaak effectiever om een ​​deel van de informatie gedurende een bepaalde periode regelmatig te bekijken dan te proberen alle informatie vlak voor een examen te onthouden. Het leren van de informatie door middel van periodieke beoordeling kan een persoon uiteindelijk meer tijd besparen en mogelijk positioneren om beter te presteren op een examen, en daardoor de GPA te verbeteren.


Gebruik maken vans

  1. Sulfide-indoolmotiliteit (SIM) Medium: het is een halfvaste agar die wordt gebruikt om de productie van waterstofsulfide (H₂S) te bepalen, indool vorming, en beweeglijkheid.
  2. Motiliteit Indool-urease (MIU) test: Het wordt gebruikt om de beweeglijkheid, indoolvorming en ureaseproductie te bepalen.

Motiliteitstest wordt ook gebruikt voor de soortdifferentiatie van gram-positieve kokken, enterokokken. Enterococcus faecium en E. faecalis zijn niet-beweeglijk, terwijl E. gallinarum en E. casseliflavus/E. flavescens zijn over het algemeen beweeglijk.

Opmerking: Opname van tetrazoliumchloride in een eindconcentratie van 0,005% in het medium is nuttig. Het tetrazolium maakt de motiliteitsagar veel makkelijker te lezen voor beweeglijkheid. Tetrazolium is kleurloos in geoxideerde vorm, maar de minder zout is rood (optredend als gevolg van bacterieel metabolisme) en geeft aan waar bacteriegroei heeft plaatsgevonden.


3.6: SIM Agar - Biologie

2) LEVENSBARE (STANDAARD) PLAATTELLER

Levensvatbare plaattelling (ook wel een standaard plaattelling genoemd) is een van de meest gebruikelijke methoden voor het tellen van bacteriën. Seriële verdunningen van bacteriën worden uitgeplaat op een agarplaat. De verdunningsprocedure beïnvloedt het totale telproces. De suspensie wordt verspreid over het oppervlak van het groeimedium. De platen worden geïncubeerd zodat kolonies worden gevormd. Vermenigvuldiging van een bacterie op vaste media resulteert in de vorming van een macroscopische kolonie die met het blote oog zichtbaar is. Aangenomen wordt dat elke kolonie voortkomt uit een individuele levensvatbare cel. Het totale aantal kolonies wordt geteld en dit aantal vermenigvuldigd met de verdunningsfactor om de concentratie van cellen in het oorspronkelijke monster te achterhalen. Telplaten moeten minimaal 30-300 kolonies hebben. Aangezien de telling van micro-organismen het gebruik van extreem kleine verdunningen en extreem grote aantallen cellen omvat, wordt bij berekeningen routinematig wetenschappelijke notatie gebruikt.

Een belangrijke beperking in deze methode is selectiviteit. De aard van het groeimedium en de incubatieomstandigheden bepalen welke bacteriën kunnen groeien en dus worden geteld. Levensvatbare telling meet alleen die cellen die in staat zijn om op het gegeven medium te groeien onder de reeks omstandigheden die voor incubatie worden gebruikt. Soms zijn cellen levensvatbaar maar niet kweekbaar.

Het aantal bacteriën in een bepaald monster is meestal te groot om direct te tellen. Als het monster echter serieel wordt verdund en vervolgens zodanig op een agar-oppervlak wordt uitgeplaat dat afzonderlijke geïsoleerde bacteriën zichtbare geïsoleerde kolonies vormen, kan het aantal kolonies worden gebruikt als een maat voor het aantal levensvatbare (levende) cellen in dat monster. bekende verdunning. De methode voor het tellen van levensvatbare platen is een indirecte meting van de celdichtheid en onthult informatie die alleen betrekking heeft op levende bacteriën.

CFU's per ml monster = het aantal getelde kolonies X De verdunningsfactor van de getelde plaat

In het geval van het bovenstaande voorbeeld, 150 x 1.000.000 = 150.000.000 CFU's per ml.

Selecteer aan het einde van de incubatieperiode alle agarplaten met tussen de 30 en 300 kolonies. Platen met meer dan 300 kolonies kunnen niet worden geteld en worden aangeduid als "te talrijk om te tellen" (TNTC). Platen met minder dan 30 kolonies worden aangeduid als "te weinig om te tellen" (TFTC).

PROCEDURE
LEVENSBARE PLAATTELLER

We zullen vier watermonsters testen voor de levensvatbare telling. De monsters omvatten:

1) water uit een drinkfontein
2) gekookt water uit een drinkfontein
3) water uit de plaatselijke rivier
4) gekookt water uit de plaatselijke rivier

Je zal nodig hebben GEGEVENS TABEL 1 om uw gegevens in te voeren en het aantal kve per ml te berekenen.

PROCEDURE
1 )
Neem 6 verdunningsbuizen, elk met 9 ml steriele zoutoplossing.
2)
Verdun 1 ml van een monster door 1 ml van het monster op te nemen en deze 1 ml in het eerste verdunningsbuisje te doseren.
3) Gebruik dezelfde procedure om 1 ml uit het eerste verdunningsbuisje te halen en in het tweede verdunningsbuisje te doseren. Trek vervolgens 1 ml uit het tweede verdunningsbuisje en giet het in het derde verdunningsbuisje. Blijf dit doen van buis tot buis totdat de verdunning is voltooid.


Afbeelding 3.3 Seriële verdunning

4 ) Breng 1 ml van elk van de laatste drie verdunningsbuizen over op het oppervlak van de overeenkomstige agarplaten.
5 ) Incubeer de agarplaten 48 uur bij 37 ° C.
6 ) Kies een plaat die tussen de 30 en 300 kolonies lijkt te hebben.


Afbeelding 3.4 Een seriële verdunning opsommen

7) Tel het exacte aantal kolonies op die plaat
8) Bereken het aantal CFU's per ml origineel monster als volgt:

CFU's per ml monster = Het aantal kolonies X De verdunning factor van de plaat geteld


Oplossingsvoorbeeld

Dit materiaal kan bestaan ​​uit stapsgewijze uitleg over het oplossen van een probleem of voorbeelden van correct schrijven, inclusief het gebruik van citaten, referenties, bibliografieën en opmaak. Dit materiaal wordt uitsluitend ter beschikking gesteld om te studeren en te leren - misbruik is ten strengste verboden.

Sim-medium
1. SIM-testmedia is een complexe driedelige test die tegelijkertijd de aanwezigheid van waterstofsulfide, indol of de mobiliteit van het micro-organisme test. Als we het sulfidegedeelte van de test niet willen gebruiken, kunnen we natriumthiosulfaat (als onderdeel van het substraat) en ijzerammoniumcitraat (als indicator) uit de media weglaten. De bovengenoemde ingrediënten zijn nodig om het optreden van waterstofsulfide te identificeren.

Hun afwezigheid kan het voor ons moeilijk maken om Salmonella spp en de differentiatie ervan van Escherichia spp te identificeren, wat ons grote voorzichtigheid vereist in het indoolgedeelte van de test, dat dan cruciaal zal zijn.

Dit is slechts een voorbeeld van de oplossing. Gebruik de aankoopknop om de volledige oplossing te zien


Bekijk de video: How to Fix No SIM Card, Invalid SIM, Or SIM Card Failure Error on Android ZTE (December 2021).