Informatie

Definitie van Dye-Reduction Test?


Kan iemand een eenvoudige uitleg of definitie geven over wat een? kleurstofreductietest is.


Kleurstofreductietesten (en er lijken er heel veel verschillende te zijn) zijn gewoon testen waarbij een kleurstof ontkleurt om u een visuele indicatie te geven of een bepaald proces plaatsvindt. Hier vindt u een voorbeeld van een kleurstofreductietest met methyleenblauw en reazurin die indirect de bacteriedichtheid in melk en room meet. Zie dit google boek voor meer info.


Kleurverminderingstests: methyleenblauw en resazurin

Van: Atherton, H.V. en Newlander, J.A. 1977. Chemie en testen van zuivelproducten. 4e ed. AVI, Westport, CT.

Methyleenblauw-reductietest

De methyleenblauwreductietest is gebaseerd op het feit dat de kleur die aan melk wordt gegeven door toevoeging van een kleurstof zoals methyleenblauw min of meer snel zal verdwijnen. Door het verwijderen van de zuurstof uit melk en de vorming van reducerende stoffen tijdens de bacteriële stofwisseling, verdwijnt de kleur. De instanties die verantwoordelijk zijn voor het zuurstofverbruik zijn de bacteriën. Hoewel bepaalde soorten bacteriën aanzienlijk meer invloed hebben dan andere, wordt algemeen aangenomen dat hoe groter het aantal bacteriën in melk, hoe sneller de zuurstof zal worden verbruikt, en hoe eerder de kleur zal verdwijnen. De tijd van reductie wordt dus genomen als een maat voor het aantal organismen in melk, hoewel het in feite waarschijnlijker is dat het meer een maat is voor de totale metabolische reacties die plaatsvinden op het celoppervlak van de bacteriën.

De methyleenblauwreductietest heeft veel van zijn populariteit verloren vanwege de lage correlatie met andere bacteriële procedures. Dit geldt in het bijzonder voor die monsters die een uitgebreide vermenigvuldiging van de psychrotrope soorten laten zien.

Apparatuur. De benodigde apparatuur bestaat uit reageerbuisjes met rubberen stoppen, een pipet of dipper met schaalverdeling om 10 ml melk af te geven en een waterbad om de monsters op 35 °C tot 37 °C te houden. Het bad moet een hoeveelheid water bevatten die voldoende is om de monsters binnen 10 minuten nadat de buisjes in het water zijn gekomen tot 35°C te verwarmen en moet een middel hebben om de monsters tijdens de incubatieperiode tegen licht te beschermen. Als een heteluchtkamer wordt gebruikt, moeten de monsters in een waterbad tot 35 ° C worden verwarmd, omdat warme lucht de melk te langzaam zou opwarmen.

De droge tabletten bevatten methyleenblauwthiocyanaat en kunnen worden verkregen bij elk van de gebruikelijke laboratoriumleveranciers. Ze moeten worden gecertificeerd door de Commission on Standardization of Biological Stains. De oplossing wordt bereid door 200 ml gedestilleerd water te autoclaveren of tijdelijk te koken in een lichtbestendige (amberkleurige) kolf met stop en vervolgens één methyleenblauw-tablet toe te voegen aan de kolf met heet water. De tablet moet volledig zijn opgelost voordat de oplossing wordt afgekoeld. De oplossing kan in het donker worden bewaard in de amberkleurige fles met stop of in een amberkleurige fles. Verse oplossing moet wekelijks worden bereid.

Procedure bij testen.–De volgende procedures worden aanbevolen.

  1. Steriliseer alle glaswerk en rubberen stoppen in een autoclaaf of in kokend water. Zorg ervoor dat al het glaswerk chemisch schoon is.
  2. Meet 1 ml van de methyleenblauwthiocyanaatoplossing af in een reageerbuis.
  3. Voeg 10 ml melk toe en stop.
  4. Buisjes kunnen onmiddellijk in het waterbad worden geplaatst of kunnen in de koelkast worden bewaard bij 0o tot 4o C voor een gemakkelijkere incubatietijd. Wanneer u klaar bent om de test uit te voeren, moet de temperatuur van de monsters binnen 10 minuten op 35 ° C worden gebracht.
  5. Wanneer de temperatuur 36o C bereikt, draait u de buisjes een paar keer langzaam om om een ​​uniforme oproming te garanderen. Schud de buizen niet. Noteer deze tijd als het begin van de incubatieperiode. Dek af om licht buiten te houden.
  6. Controleer monsters op ontkleuring na 30 minuten incubatie. Voer daarna elk uur de volgende metingen uit.
  7. Verwijder na elke meting ontkleurde buisjes en maak dan langzaam één volledige omkering van de resterende buisjes.
  8. Record reductietijd in hele uren tussen laatste inversie en ontkleuring. Als het monster bijvoorbeeld na L 5 uur nog steeds blauw was, maar ontkleurd (wit) was bij de aflezing van 2,5 uur, zou de reductietijd voor methyleenblauw worden geregistreerd als 2 uur. Ontkleuring wordt als voltooid beschouwd wanneer viervijfde van de kleur is verdwenen.

Classificatie.–De voorgestelde classificatie wordt vermeld.

Klasse 1. Uitstekend, niet ontkleurd in 8 uur.

Klasse 2. Goed, ontkleurd in minder dan 8 uur maar niet minder dan 6 uur.

Klasse 3. Redelijk, ontkleurd in minder dan 6 uur maar niet minder dan 2 uur.

Klasse 4. Slecht, ontkleurd in minder dan 2 uur.

Factoren die van invloed zijn op de test. Veel factoren zijn van invloed op de methyleenblauwreductietest en daarom moeten de bewerkingsstappen uniform zijn.

Aangezien het zuurstofgehalte moet worden opgebruikt voordat de kleur verdwijnt, heeft elke manipulatie die het zuurstofgehalte verhoogt, invloed op de test. Koude melk bevat meer zuurstof dan warme melk door melk heen en weer te gieten van de ene container naar de andere verhoogt de hoeveelheid, en tijdens het melken kan er veel zuurstof worden opgenomen.

Het soort organismen heeft invloed op de mate van reductie. De coliformen lijken de snelst reducerende organismen te zijn, op de voet gevolgd door Streptococcus lactis, enkele fecale streptokokken en bepaalde micrococci. Thermoduric en psychrotrofe bacteriën verminderen methyleenblauw zeer langzaam of helemaal niet. Een groot aantal leukocyten heeft een wezenlijke invloed op de reductietijd.

Licht versnelt de reductie en daarom moeten de tests afgedekt worden gehouden. De concentratie van de kleurstof moet uniform zijn, aangezien een verhoogde concentratie de reductietijd verlengt. Het verhogen van de incubatietemperatuur verhoogt de activiteit van de bacteriën en verkort daardoor de reductietijd.

Door het opromen van de testmonsters worden een aantal organismen uit het melklichaam verwijderd en met het oprijzende vet naar de oppervlakte gebracht. Deze factor veroorzaakt variaties in de reductietijd, omdat de bacteriën niet gelijkmatig verdeeld zijn. De nauwkeurigheid van de test wordt verhoogd, de reductietijd verkort en de ontkleuring gelijkmatiger als de monsters tijdens de incubatie periodiek worden omgekeerd.

De Resazurin-test

De resazurin-test wordt uitgevoerd op dezelfde manier als de methyleenblauw-reductietest, waarbij de kwaliteit wordt beoordeeld op basis van de kleur die wordt geproduceerd na een bepaalde incubatieperiode of op de tijd die nodig is om de kleurstof tot een bepaald eindpunt te reduceren. Er zijn tal van wijzigingen voorgesteld. De twee meest gebruikte zijn de "test van één uur" en de "drievoudige leestest" die worden genomen na een, twee en drie uur incubatie. Andere aanpassingen hebben waarde in specifieke toepassingen.

De procedure voor het maken van de resazurine-test is als volgt: Bereid de resazurine-oplossing door één resazurine-tablet (kleurstofgehalte/tablet, ongeveer 11 mg, gecertificeerd door Biological Stain Commission) op te lossen in 200 ml heet gedestilleerd water, zoals werd gedaan in de methyleenblauw-test . Plaats een ml kleurstofoplossing in een steriele reageerbuis en voeg vervolgens 10 ml monster toe. Sluit het buisje af, plaats het in de incubator en, wanneer de temperatuur 36o C bereikt, keer het om om de melk en de kleurstof te mengen. Incubeer bij 36o C. Buizen worden onderzocht en geclassificeerd aan het einde van een uur in de "één-uur-test" of aan het einde van drie opeenvolgende uurintervallen in de "drievoudige afleestest". De volgende verhoudingen van kleur en kwaliteit worden algemeen aanvaard:

Kleur van monster: kwaliteit van melk

  1. Blauw (geen kleurverandering): Uitstekend
  2. Blauw tot dieppaars: Goed
  3. Diep mauve tot diep roze: Redelijk
  4. Diep roze tot witachtig roze: Slecht
  5. Wit: Slecht

De resazurin-test kan een waardevolle tijdbesparende tool zijn als deze correct wordt uitgevoerd en intelligent wordt geïnterpreteerd, maar moet worden aangevuld met microscopisch onderzoek.

Resultaten over de betrouwbaarheid van de resazurin-tests zijn tegenstrijdig. Een studie waarbij de resazurin-test werd vergeleken met de Breed-microscopische methode op 235 monsters, vond de test betrouwbaar. Andere rapporten stellen dat de resazurin-test een onbetrouwbare index van bacteriologische kwaliteit in melk is. Een belangrijk punt van kritiek op de methode is dat de resazurine-reductietijd van gekoelde melk in flessen bij 20 of 37 ° C veel te lang is om van enige waarde te zijn bij het evalueren van bacteriologisch bederf van opgeslagen melk.

Standard Methods merkt op dat de resultaten van methyleenblauw- of resazurin-tests in geen geval in termen van bacterieaantallen mogen worden gerapporteerd. De twee kleurstofreductieprocedures worden in meer detail beschreven in hoofdstuk 15 van de dertiende editie van standaardmethoden, samengesteld door de American Public Health Association.


Pigment

Wiemann heeft de methode gebruikt om pigmenten in dinosauruseieren te identificeren.

Het pigment moet licht van vergelijkbare golflengten absorberen om de interne ruis te verminderen.

Het pigment s - chlorofylen, in groene planten - absorberen licht en brengen de energie over naar een reactiecentrum, waar de productie van chemische energie voor gebruik door de cel wordt gestart.

Het brengt zuurstof en een pigment genaamd luciferine samen om licht te creëren.

Dat licht wordt veroorzaakt door het pigment dat de koralen kleur geeft.

Hoewel de apparatuur hetzelfde is, gebruikt een tatoeëerder inkt en gebruiken wij pigment.

The Daily Pic: Gaan de prints van de YBA over de kleur van pigment of over de kleur van geld?

Mariamu ziet er veel jonger uit dan haar leeftijd, en toch is haar witte, pigmentvrije huid leerachtig geworden door de zon.

Als de afbeelding door een vervalser op het doek was geschilderd, zouden de verfsporen van het pigment op het oppervlak zijn achtergebleven.

Ze komen meestal samen voor, maar het pigment is niet zelden alleen aanwezig.

De oudere vormen zijn grotere kleurloze lichamen die korrels bruin pigment bevatten.

De figuren waren niet alleen omlijnd door de stippen, ze waren ook overal versierd met hetzelfde pigment in gestippelde dwarsbanden.

De muren waren bedekt met fijn stucwerk, wit en stevig - een bewijs van de oudheid - en versierd met banden van een felrood pigment.

Het oppervlak van de muur wordt vervolgens ingewreven met een zachte baksteen van dezelfde kleur, of het werk kan worden gekleurd met pigment.


Beitsen

Hoogopgeleide ambachtslieden met goed bewaakte geheime formules maakten van het verven een goed beschermd beroep. De vorming van verschillende kleuren door het mengen van rode, blauwe en gele kleurstoffen was in de oudheid algemeen bekend, evenals het gebruik van metaalzouten om het vasthouden van kleurstoffen op het gewenste materiaal te bevorderen en de resulterende kleuren te variëren. Natuurlijke kleurstoffen kunnen niet rechtstreeks op katoen worden aangebracht, in tegenstelling tot wol en zijde, hoewel katoen kan worden geverfd door middel van vatting of door voorbehandeling met anorganische zouten die bekend staan ​​als beitsen (van Latijn morde, wat "bijten" betekent). Deze worden geadsorbeerd aan de vezel en reageren met de kleurstof om een ​​minder oplosbare vorm te produceren die aan de stof wordt vastgehouden. Aluin, KAl(SO4)2 × H2O, evenals ijzer-, koper- en tinzouten waren veel voorkomende oude beitsen. Ongetwijfeld bevatten de geheime processen andere ingrediënten om de uiteindelijke resultaten te verbeteren. Beitsen werden ook gebruikt om de kleuren geproduceerd uit een enkele kleurstof te variëren. Bijvoorbeeld behandeling met aluminiumhydroxide, Al(OH)3, voor het verven met alizarine produceert Turkije rood, het traditionele rood van Britse en Franse legeruniformen. Alizarine geeft violette kleuren met magnesiumbeitsen, paarsrood met calciumbeitsen, blauw met bariumbeitsen en zwartviolet met ijzerhoudende zouten. Rond 1850 werd ontdekt dat chroomzouten, gebruikt als beitsmiddel, een betere kleurvastheid gaven en na verloop van tijd grotendeels de andere verdringen. chroombeitsen worden nog steeds veel gebruikt voor wol en, tot op zekere hoogte, voor zijde en nylon.


Veiligheid en bijwerkingen

In zeldzame gevallen hebben mensen allergische reacties op contrastmiddelen. Het is van cruciaal belang dat u goed communiceert met uw arts. Vertel hen over eventuele allergieën, recente ziekten of medicijnen die u heeft. Als u een bekende contrastallergie heeft - of risico loopt - zal het ziekenhuispersoneel alle voorzorgsmaatregelen nemen om u te beschermen tegen een negatieve reactie.

Zelden worden patiënten geconfronteerd met milde bijwerkingen van contrast met medische beeldvorming, zoals misselijkheid en diarree. Maar de meeste mensen reageren helemaal niet. Als u contrastkleurstoffen krijgt voor uw medische beeldvormingsonderzoek, zorg er dan voor dat u daarna veel water drinkt. Je lichaam zal het contrast op natuurlijke wijze verdrijven.

Bekijk ons ​​artikel over MRI versus CT voor meer informatie over twee veelvoorkomende procedures waarbij contrastmaterialen worden gebruikt. Als u geïnteresseerd bent in het laten uitvoeren van een screening bij het UVA Health System, bel dan 1.434.243.0321 om vandaag nog een consult te regelen.


Hoe werkt gramkleuring?

Gramkleuring omvat drie processen: kleuring met een in water oplosbare kleurstof genaamd kristalviolet, ontkleuring en tegenkleuring, meestal met safanine. Door verschillen in de dikte van een peptidoglycaanlaag in het celmembraan tussen Gram-positieve en Gram-negatieve bacteriën, behouden Gram-positieve bacteriën (met een dikkere peptidoglycaanlaag) kristalvioletkleuring tijdens het ontkleuringsproces, terwijl Gram-negatieve bacteriën de kristalvioletkleuring verliezen en worden in plaats daarvan gekleurd door de safranine in het laatste kleurproces. Het proces omvat drie stappen:

  1. Cellen worden gekleurd met kristalviolette kleurstof. Vervolgens wordt een Gram's jodiumoplossing (jodium en kaliumjodide) toegevoegd om een ​​complex te vormen tussen het kristalviolet en jodium. Dit complex is een groter molecuul dan de originele kristalviolette vlek en jodium en is onoplosbaar in water.
  2. Een ontkleuringsmiddel zoals ethylalcohol of aceton wordt aan het monster toegevoegd, waardoor de peptidoglycaanlaag uitdroogt, krimpt en strakker wordt. Het grote kristalviolet-jodiumcomplex is niet in staat om deze aangescherpte peptidoglycaanlaag binnen te dringen en wordt dus in de cel opgesloten in Gram-positieve bacteriën. Omgekeerd wordt het buitenste membraan van Gram-negatieve bacteriën afgebroken en kan de dunnere peptidoglycaanlaag van Gram-negatieve cellen het kristalviolet-jodiumcomplex niet vasthouden en gaat de kleur verloren.
  3. Een tegenkleuring, zoals de zwak in water oplosbare safranine, wordt aan het monster toegevoegd, waardoor het rood kleurt. Omdat safranine lichter is dan kristalviolet, verstoort het de paarse kleur in Gram-positieve cellen niet. De ontkleurde Gram-negatieve cellen zijn echter rood gekleurd.

Een zwaar entmateriaal van het testorganisme wordt geïncubeerd in een bouillon die nitraat bevat. De organismen die in staat zijn het nitraatreductase-enzym te produceren, reduceren het in de bouillon aanwezige nitraat tot nitriet dat vervolgens verder kan worden gereduceerd tot stikstofoxide, lachgas of stikstof.

De nitraatreductietest is gebaseerd op de detectie van: nitriet en het vermogen om een ​​rode verbinding te vormen wanneer het reageert met sulfanilzuur om een ​​complex te vormen (nitriet-sulfanilzuur) dat vervolgens reageert met een α-naftylamine om een ​​rood precipitaat (prontosil) te geven, wat een in water oplosbare azokleurstof is.

Echter, alleen wanneer nitraat in het medium aanwezig is, zal rode kleur worden geproduceerd. Als er geen rode kleur in het medium is nadat je sulfanilzuur en α-naftylamine hebt toegevoegd, betekent dit alleen dat er geen nitriet in het medium aanwezig is.

Er zijn twee verklaringen voor deze observatie.

  1. Het nitraat is mogelijk niet verlaagd, de stam is nitraat-negatief.
  2. Het nitraat kan zijn gereduceerd tot nitriet dat vervolgens volledig is gereduceerd tot stikstofoxide, lachgas of stikstof dat niet zal reageren met de reagentia die reageren met nitriet. De stam is nitraat-positief.

Dus als nitriet niet wordt gedetecteerd, is het noodzakelijk om te testen of het organisme nitraat heeft verminderd tot meer dan nitriet. Dit kan indirect worden gedaan door een kleine hoeveelheid zinkpoeder aan de kweek toe te voegen. Zinkpoeder katalyseert de reductie van nitraat tot nitriet. De ontwikkeling van de rode kleur bij toevoeging van zink geeft aan dat nitraat niet door het organisme werd verminderd, wat erop wijst dat het testorganisme niet in staat is nitraat te verminderen. Als er geen kleurverandering optreedt na de toevoeging van zink, geeft dit aan dat het organisme nitraat heeft gereduceerd tot een van de andere stikstofverbindingen en dus een nitraatverlager is.

Opmerking: Een Durham-buisje wordt in de stikstofbouillon geplaatst om achteruitgang van de bouillon vóór inoculatie te detecteren, zoals blijkt uit gasvorming in de buis en om denitrificatie te identificeren door organismen die gas produceren via alternatieve routes.


Wat is MTS-assay?

MTS-assay is een nieuwe methode voor MTT-assay omdat het een nieuw type tetrazoliumkleurstof gebruikt, wat uiteindelijk resulteert in een waterig, oplosbaar formazanproduct. Hier is de tetrazoliumkleurstof die in de MTS-test wordt gebruikt 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyfenyl)-2-(4-sulfofenyl)-2H-tetrazolium. De vorming van de oplosbare formazankleurstof vindt plaats in aanwezigheid van fenazinemethosulfaat (PMS), dat dient als een intermediaire elektronenacceptor, die elektronen van NADH overdraagt ​​om de tetrazoliumkleurstof te reduceren, waardoor het oplosbare formazanproduct wordt gevormd.

Figuur 2: MTT-plaat

De directe vorming van een oplosbaar formazanproduct vermindert de oplosbaarheidsstap van het formazanproduct van de MTT-assay. Daarom is MTS-assay efficiënter en minder tijdrovend. Het verwijdert ook mogelijke fouten zoals celverlies, wat kan gebeuren tijdens het verwijderen van het medium en het oplossen van het formazan-product. Bovendien is het resulterende formazan-product donkerder van kleur, wat de gevoeligheid en de nauwkeurigheid van de test verhoogt.


3D-celcultuur - drievoudige kleuring van levende / dode / totale cellen

De Cell Viability Imaging Kit is een driekleurentest die kan worden gebruikt met 2D- en 3D-celculturen voor gelijktijdige fluorescentiekleuring van levensvatbare cellen (Calcein-AM), dode cellen (Propidium Iodide/PI), evenals totale cellen (Hoechst 33342).

  • Calcein-AM fluoresceert groen bij het binden van calcium en vertrouwt op esterase-activiteit die alleen aanwezig is in metabolisch actieve levensvatbare cellen.
  • Propidiumjodide (PI) is een nucleaire kleurstof die wordt uitgesloten door het membraan van levende cellen, maar door het beschadigde membraan van dode cellen gaat, intercaleert met het DNA om een ​​sterke rode fluorescentie uit te zenden.
  • Hoechst 33342 is een DNA-kleurstof die een lage cytotoxiciteit vertoont. Het fluoresceert blauw en wordt gebruikt als een indicator van het totale aantal cellen.

Oxidase-testprincipe:

Het principe van de oxidasetest hangt af van het mechanisme van: oxidatie reactie:, waarbij de organismen die het cytochroomoxidase-enzym bezitten, de kunnen oxideren TMPD reagens in de eindproducten zoals blauwgekleurd complex (indofenol) en water.

Oxidase-test onderscheidt micro-organismen opmerkelijk in twee specifieke groepen, namelijk oxidase-positief en oxidase-negatief. Oxidase-positieve organismen ondergaan aërobe ademhaling, waarbij ze TMPD gebruiken als een elektronendonor.

TMPD-oxidasereagens zal de elektronen doorgeven aan de cytochroom-c oxidasen, waarbij het TMPD-reagens verandert in a TMPD-worteltje of verwerft blauw-paarse kleur.

Ten slotte zal de terminale zuurstofdrager de elektronen van cytochroomoxidase accepteren en zich binden met protonen om water vrij te maken. In tegenstelling hiermee zal het organismentekort van cytochroomoxidasen het TMPD-reagens niet oxideren.

Testreagens

Om de oxidasetest uit te voeren, hebben we nodig:

  1. Oxidase-reagens: Om dit reagens te bereiden, lost u 0,60 gram . op TMPD (N, N, N'8217, N'8217-tetramethyl-p-fenyleendiamine dihydrochloride), 0,02 gram van de stabilisator in 100 ml dimethylsulfoxide.
  2. Oxidase-schijven: Dit zijn de papieren filterschijven die niet alleen verzadigd zijn met DMPD oxalaat (N, N''8211 dimethyl-p-fenyleendiamineoxalaat), α-naftol, en ascorbinezuur maar vermindert ook de bereidingstijd van het oxidasereagens.

Procedure en methoden van oxidasetest

Oxidase-test kan worden uitgevoerd door gebruik te maken van de volgende methoden:

Droge filterpapiermethode

Bij deze methode moeten we het Whatman's no.1-filterpapier verzadigen in het 1% N, N, N-tetramethyl-p-fenyleendiamine-dihydrochloride-reagens. Onderwerp het filtreerpapier daarna aan het proces van: vriesdrogen en bewaar het later in een fles met schroefdop (onder donker plaats).

Haal vervolgens het filterpapier eruit en bevochtig het met wat gedestilleerd water. Plaats daarna het filtreerpapier in een petrischaal en bereid een bacteriële uitstrijkje overheen. Noteer ten slotte het waarnemingsresultaat voor eventuele kleurveranderingen van het filterpapier.

Natte filterpapiermethode

Neem bij deze methode de filtreerpapierschijven doordrenkt met het oxidase-reagens en wrijf rechtstreeks over de kweek van het testorganisme via een houten applicator. Bekijk ten slotte het filterpapier voor het verschijnen van een blauwpaarse kleur.

Directe plaatmethode

Het is een zeer handige methode en een procedure in één stap, waarbij TMPD-oxidasereagens aan de verdachte kolonies.

Swab-methode:

Het is een eenvoudige procedure waarbij het dompelen van de steriel wattenstaafje in de oplossing van 1% TMPD-reagens. Raak daarna het wattenstaafje voorzichtig aan over de vermoedelijke kolonie en zoek naar eventuele kleurveranderingen in de knop van het wattenstaafje.

Reageerbuismethode:

Bereid bij deze methode voedingsbodemmedia voor en giet tot 4,5 ml in de reageerbuis. Ent vervolgens het testorganisme en incubeer gedurende ten minste 24-48 uur bij 35 graden Celsius.

Voeg na incubatie oxidasereagens (0,2 ml) toe aan de kweekbuis en schud krachtig. Kijk ten slotte naar de kweekbuizen voor het verschijnen van een blauwpaarse kleur.

Test resultaten

Er kunnen drie mogelijke uitkomsten zijn:

  • Positief: Intense diep blauwpaarse kleur ontwikkelt zich binnen 10 seconden.
  • Vertraagd positief: Na 10 seconden ontwikkelt zich een intense diep blauwpaarse kleur.
  • Negatief: Er treedt geen kleurverandering op door toevoeging van een oxidasereagens.

Oxidase-test stelt het bestaan ​​​​van cytochroomoxidase-enzym binnen de elektronentransportketen van mitochondriën. Het onderscheidt de organismen in oxidase-positief en oxidase-negatief, gebaseerd op de aanwezigheid van cytochroomoxidase in het elektronentransportsysteem.

Aerobe bacteriën bezitten cytochroomoxidase dat deel uitmaakt van de aerobe ademhalingsketen. Zo onderscheidt de oxidasetest ook: aerobe organismen van de facultatieve aeroben, strikte en facultatieve anaëroben. Oxidase-test is nuttig bij soortvorming, omdat het differentieert Pseudomonas van andere verwante soorten.

Beperkingen

De reagentia moeten anders vers worden bereid, de oxidasetest kan uiteenlopende resultaten opleveren. Een testorganisme moet 18-24 uur oud zijn. Het testorganisme dat is geïsoleerd uit niet-selectieve en niet-differentiële media heeft de voorkeur voor identificatie en classificatie.

Groeimedium aangevuld met kleurstof kan foutieve resultaten geven. Het gebruikt een platina-lus in plaats van ijzer of nichroom om vals-positieve resultaten van de oxidatie van het oppervlak tijdens het branden te voorkomen.


Bekijk de video: DYE REDUCTION TESTS (December 2021).