Informatie

6.8: Chemo-osmose (een overzicht) - Biologie


Een van de meest verrassende ontdekkingen in de biologie was het wijdverbreide, bijna universele gebruik van H+ gradiënten om ATP te genereren. Wat oorspronkelijk bekend stond als de chemiosmotische hypothese werd geproduceerd door de excentrieke Britse wetenschapper Peter Mitchell (1920-1992)176. Voordat de betekenis van H+-membraangradiënten bekend was, stelde Mitchell voor dat energie die werd opgevangen door de absorptie van licht (door fototrofen) of de afbraak van moleculen in stabielere moleculen (door verschillende soorten chemotrofen) berustte op hetzelfde basale (homologe) mechanisme, namelijk de generatie van H+ gradiënten over membranen (het plasmamembraan in prokaryoten of de interne membranen van mitochondriën of chloroplasten (intracellulaire organellen, afgeleid van bacteriën - zie hieronder) in eukaryoten.

Waarom denken we dat deze processen een vergelijkbare evolutionaire wortel hebben, dat ze homoloog zijn? Kort gezegd is het de waarneming dat in zowel op licht als op chemicaliën gebaseerde processen gevangen energie wordt overgedragen door de beweging van elektronen door een in een membraan ingebedde "elektronentransportketen". Een elektronentransportketen omvat een reeks membraan- en geassocieerde eiwitten en een reeks reductie-oxidatie- of redoxreacties (zie hieronder) waarbij elektronen van een hoge-energiedonor naar een lagere energie-acceptor gaan. Een deel van het energieverschil tussen de twee wordt gebruikt om H . te verplaatsen+ ionen over een membraan, waardoor een H . ontstaat+ concentratiegradiënt. Vervolgens de thermodynamisch gunstige beweging van H+ langs deze concentratiegradiënt (over het membraan) wordt gebruikt om ATP-synthese aan te sturen, een thermodynamisch ongunstig proces. ATP-synthese zelf omvat het roterende ATP-synthase. De reactie kan worden geschreven:

[H^+_{buiten} + ADP + P_i ⇌ ATP + H_2O + H^+_{binnen}]

waarbij "binnen" en "buiten" verwijzen naar compartimenten die worden gedefinieerd door het membraan dat de elektronentransportketen en het ATP-synthase bevat. Nogmaals, deze reactie kan achteruit lopen. Wanneer dit gebeurt, werkt het ATP-synthase als een ATPase (ATP-hydrolase) dat H . kan pompen+ (of andere moleculen) tegen de concentratiegradiënt in. Dergelijke pompende ATPasen zorgen voor de biologisch meest belangrijke moleculaire gradiënten over membranen. Bij zo'n reactie:

ATP + H2O + molecuul in gebied met lage concentratie ⇌ ADP + Pi + molecuul in gebied met lage concentratie.

Het belangrijkste verschil tussen fototrofen en chemotrofen is hoe elektronen met hoge energie de elektronentransportketen binnenkomen.


Remmers van HSP90 bij melanoom

HSP90 (heat shock protein 90) is een ATP-afhankelijke moleculaire chaperonne die betrokken is bij een goede vouwing en rijping van honderden eiwitten. HSP90 komt overvloedig tot expressie bij kanker, waaronder melanoom. HSP90-clienteiwitten zijn de belangrijkste oncoproteïnen van verschillende signaalroutes die de ontwikkeling, progressie en respons op therapie van melanoom beheersen. Een aantal natuurlijke en synthetische verbindingen met verschillende chemische structuren en bindingsplaatsen binnen HSP90 zijn geïdentificeerd als selectieve HSP90-remmers. De meeste HSP90-gerichte middelen beïnvloeden de N-terminale ATPase-activiteit van HSP90. In tegenstelling tot N-terminale remmers induceren middelen die een interactie aangaan met de middelste en C-terminale domeinen van HSP90 geen HSP70-afhankelijke cytoprotectieve respons. Verschillende remmers van HSP90 werden getest tegen melanoom in preklinische onderzoeken en klinische onderzoeken, wat bewijs levert dat deze middelen kunnen worden beschouwd als een enkele of complementaire therapeutische strategie. Deze review vat de huidige kennis samen over de rol van HSP90-eiwit bij kanker met focus op melanoom, en geeft een overzicht van structureel verschillende HSP90-remmers die worden beschouwd als potentiële therapieën voor de behandeling van melanoom.

trefwoorden: Apoptose Chaperone HSP70 HSP90-remmers Melanoom Gerichte therapie.

Belangenconflict verklaring

De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflict hebben.

Figuren

Schematische weergave van HSP90-eiwit...

Schematische weergave van de structuur van het HSP90-eiwitdomein. Functies van elk domein en HSP90-interactie...

Voorbeeldige chaperonnecyclus van HSP90.…

Voorbeeldige chaperonnecyclus van HSP90. De opeenvolgende stappen zijn gemarkeerd met cijfers. Uitgevouwen…

Belangrijke melanoom-geassocieerde signaalroutes, en...

Belangrijke melanoom-geassocieerde signaalroutes en hun rol bij melanoom. Eiwitten geïdentificeerd als direct...

HSP90-remmers die anti-melanoomactiviteit uitoefenen.…

HSP90-remmers die anti-melanoomactiviteit uitoefenen. Verbindingen werden geclassificeerd op basis van hun bindingsplaatsen...


&alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A

&alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A is een sialidase met brede specificiteit, die lineaire en vertakte niet-reducerende terminale siaalzuurresiduen splitst van glycoproteïnen, glycopeptiden en oligosachariden. Het kan worden gebruikt voor glycananalyse en karakterisering en intacte glycoproteïne-remodellering, in vitro en in vivo.

  • Recombinant enzym zonder detecteerbare endoglycosidase of andere exoglycosidasen die activiteiten vervuilen
  • Werkt op zowel Neu5Ac als Neu5Gc
  • Dubbel verteren met andere exoglycosidasen en endoglycosidasen
  • Tolerant voor matige niveaus (0,5-1,0%) van wasmiddelen
  • &ge95% zuiverheid, zoals bepaald door SDS-PAGE en intact ESI-MS
  • Optimale activiteit en stabiliteit tot 24 maanden

Neuraminidase is de algemene naam voor Acetyl-neuraminylhydrolase (Sialidase). &alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A katalyseert de hydrolyse van alle lineaire en vertakte niet-reducerende terminale siaalzuurresiduen van glycoproteïnen en oligosachariden. Het enzym maakt de &alpha2-3- en &alpha2-6-bindingen met een iets hogere snelheid vrij dan de &alpha2-8- en &alpha2-9-bindingen.

Specificiteit:


Gedetailleerde specificiteit:
&alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A splitst vertakte siaalzuurresten die aan een interne rest zijn gekoppeld. Dit oligosacharide van fetuin is een voorbeeld van een zijtak siaalzuurresidu dat efficiënt kan worden gesplitst (1).


Productbron:

Geleverde reagentia

De volgende reagentia worden bij dit product geleverd:

&alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A P0722SVIAL -20 1 x 0,04 ml 20.000 eenheden/ml
GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X
&alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A P0722LVIAL -20 1 x 0,2 ml 20.000 eenheden/ml
GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

Eenheidsdefinitie

Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om > 95% van het terminale &alpha-Neu5Ac te splitsen van 1 nmol Neu5Ac&alpha2-3Gal&beta1- 3GlcNAc&beta1-3Gal&beta1-4Glc-AMC, in 1 uur bij 37°C met een totaal reactievolume van 10 &mul.

Eenheid Definitie Assay
Tweevoudige verdunningen van &alpha2- 3,6,8,9 Neuraminidase A worden geïncubeerd met 1 nmol AMC-gelabeld substraat en 1X GlycoBuffer 1 in een 10 &mul reactie. Het reactiemengsel wordt 1 uur bij 37°C geïncubeerd. Scheiding van reactieproducten wordt zichtbaar gemaakt via dunnelaagchromatografie (3).

Reactievoorwaarden

1X GlycoBuffer 1
5 mM CaCl2
50 mM natriumacetaat
(pH 5,5 @ 25°C)

Opslagbuffer

50 mM NaCl
20 mM Tris-HCl
1 mM EDTA
pH 7,5 @ 25°C

Warmte-inactivatie

Molecuulgewicht

Specifieke activiteit

Bijbehorende producten

  1. Reacties kunnen lineair worden opgeschaald om grotere reactievolumes te accommoderen.
  2. De benodigde hoeveelheid exoglycosidase-enzym varieert wanneer verschillende substraten worden gebruikt. Begin met 1&ndash2 &mul voor 1 &mok glycoproteïne of 100 nM oligosacharide gedurende één uur in een 10&ndash25 &mul-reactie. Als er nog onverteerd materiaal is, laat de reactie dan een nacht staan.
  3. Hogere enzymconcentraties en langere incubatietijden kunnen nodig zijn voor splitsing van vertakte structuren.
  1. Iwamori, M., Ohta, Y., Uchida, Y. en Tsukada, Y. (1997). Glycocon. J. 1, 67-73.
  2. McLeod, E. New England Biolabs, Inc. Niet-gepubliceerde waarneming
  3. Wong-Madden, S.T. en Landry, D. (1995). Glycobiologie. 5, 19-28.
  1. Wat is het verschil tussen de vier Neuraminidase-enzymen die door NEB worden verkocht: &alpha2-3,6,8 Neuraminidase, &alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A, &alpha2-3 Neuraminidase en &alpha2-3 Neuraminidase S?
  2. Wat is een goede positieve controle voor &alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A?
  3. Kan ik &alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A gebruiken in een dubbele digestie met andere exoglycosidasen en/of endoglycosidasen?
  4. Kan ik &alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A gebruiken in een dubbele digest met Endo H/Hf, O-Glycosidase of PNGase F?
  5. Heeft dit enzym denaturerende omstandigheden nodig om op glycoproteïnen in te werken?
  6. Wat is een goede methode om een ​​glycaan of glycopeptide opnieuw te zuiveren na een behandeling met exoglycosidase?
  7. Remmen detergentia glycosidases?
  8. Wat zijn glycosidasen en hun toepassingen?
  9. Splitsen de NEB Neuraminidase-enzymen zowel N-acetylneuraminezuur (Neu5Ac) als N-glycolylneuraminezuur (Neu5Gc) residuen?
  10. Is het nodig om mijn glycoproteïne gelijktijdig te behandelen met Neuraminidase en? O-Glycosidase?
  11. Hoeveel exoglycosidase moet worden gebruikt?
  • Vergeet Neuraminidase niet op te nemen in een spijsvertering met O-Glycosidase.
  • Als u een oligosacharide probeert te splitsen met een vertakt siaalzuurresidu, wilt u &alpha2-3,6,8,9 Neuraminidase A gebruiken

Productcitatietool

  • Albrecht, S., Vainauskas, S., Stöckmann, H., McManus, C., Taron, C.H. en Rudd, P.M. (2016) . Uitgebreide profilering van glycosfingolipide-glycanen met behulp van een nieuwe brede specificiteit endoglycoceramidase in een workflow met hoge doorvoer. Mei 388 (9), 4795-802. Anale Chem.. PubMedID: 27033327

Specificaties:

  • P0722S_L_v1_0021602
  • P0722S_L_v1_0011605
  • P0722S_L_v1_0021608
  • P0722S_L_v1_0021612
  • P0722S_L_v1_0021706
  • P0722S_L_v1_0021710
  • P0722S_L_v1_0021801
  • P0722S_L_v1_0021803
  • P0722L_v1_10020203
  • P0722S_v1_10020388
  • P0722S_v1_10022690
  • P0722L_v1_10028396
  • P0722S_v1_10031676
  • P0722L_v1_10040007
  • P0722S_v1_10040005
  • P0722S_v1_10057252
  • P0722L_v0_10057251
  • P0722L_v1_10064911
  • P0722S_v1_10064910
  • P0722L_v1_1070591
  • P0722S_v1_1075161
  • P0722S_v1_10079100
  • P0722L_v1_10084288
  • P0722S_v1_10084289
  • P0722L_v1_10091048
  • P0722S_v1_10110147
  • P0722S_v1_10110741

Dit product valt onder een of meer patenten, handelsmerken en/of copyrights die eigendom zijn van of beheerd worden door New England Biolabs, Inc (NEB).

Hoewel NEB haar producten voor verschillende toepassingen ontwikkelt en valideert, kan het voor het gebruik van dit product van de koper zijn dat hij voor bepaalde toepassingen aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden moet verkrijgen.

Neem voor meer informatie over commerciële rechten contact op met het Global Business Development-team van NEB via [email protected]

Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden. Dit product is niet bedoeld voor therapeutische of diagnostische doeleinden bij mensen of dieren.

New England Biolabs (NEB) zet zich in voor het beoefenen van ethische wetenschap en wij geloven dat het onze taak als onderzoekers is om de belangrijke vragen te stellen die, wanneer ze worden beantwoord, zullen helpen onze kwaliteit van leven en de wereld waarin we leven te behouden. Dit onderzoek moet echter altijd op een veilige en ethische manier gebeuren. Kom meer te weten.


Glasgow Coma Schaal Interpretatie

De interpretatie van de Glasgow Coma Scale is niet zo eenvoudig als het lijkt. Zelfs medisch geschoold personeel heeft problemen om te beoordelen of een patiënt bij bewustzijn of bewusteloos is. Moderne geneeskunde betekent ook dat veel traumaslachtoffers ter plaatse worden geïntubeerd. Het is op dit moment onmogelijk om het bewustzijn en de opwinding te meten. Zelfs het toedienen van pijnmedicatie zal de resultaten beïnvloeden.

Patiënten die ter plaatse zijn geïntubeerd, hebben een kunstmatig Glasgow Coma Scale-resultaat en worden meestal beoordeeld met behulp van de Full Outline of UnResponsiveness (FOUR)-score.

Veel variabelen maken het moeilijk om het juiste reactieniveau te observeren. Gezichtstrauma kan het beoordelen van oogbewegingen bemoeilijken. Een buitenlands slachtoffer spreekt mogelijk de taal van de hulpdiensten niet en is niet in staat om commando's op te volgen. Een slachtoffer kan doof zijn. Alcohol- en drugsgebruik kunnen alle drie de responsparameters beïnvloeden. Door schade aan het ruggenmerg worden motorische reacties en bewegingen als reactie op pijn onbetrouwbaar.

De Glasgow Coma Scale-scorereeks is niet alleen de som van alle drie de tests, het meet de opwinding, het verbaal beoordeelde bewustzijn en het motorisch beoordeelde bewustzijn afzonderlijk. De totale Glasgow Coma Scale-score is een snelle manier om de reactie van slachtoffers in een noodsituatie te bepalen, maar de afzonderlijke delen zijn belangrijker tijdens langdurige zorg.

Dit betekent dat score-uitdrukking zowel als totaal als per element moet worden genoteerd, bijvoorbeeld GCS11 = E5V2M4.

Een resultaat op de Glasgow Coma Scale 7 zou op dezelfde manier in zijn elementen worden opgesplitst. Dit is belangrijk voor medisch personeel omdat GCS7 = E1V3M4 en GCS7 = E2V1M4 verschillende behandelingen of diagnoses kunnen aangeven.

Het is onmogelijk om 0 te scoren Glasgow Coma Schaal 3 is de laagst mogelijke uitkomst. Glasgow Coma Scale 15 is de hoogst mogelijke score.


Waar worden chylomicronen gesynthetiseerd?

Chylomicronen synthetiseren in de cellen van de darmwand van waaruit ze in het bloedplasma terechtkomen. De samenstelling is 86-94% triglyceriden, 3-8% fosfolipiden, 0,5-1% cholesterol en 2% speciale eiwitten die apolipoproteïnen worden genoemd. Het totale lipidengehalte is 98-99%. Het heeft de laagste dichtheid.

Chylomicronen synthetiseren

Wat is de functie en het katabolisme van chylomicronen?

De functie van Chylomicron is om exogene lipiden naar de lever, het vet, het hart en het skeletspierweefsel te transporteren. Op deze locaties verlaagt de activiteit van lipoproteïnelipase de triglyceriden. Wanneer het grootste deel van de kern van triacylglycerol is gehydrolyseerd, vormen zich de residuen en worden deze overgebracht naar de lever.

De katabolisme van deze lipoproteïnen lijkt sterk op elkaar, hoewel ze als volgt synthetiseren als reactie op verschillende omstandigheden:

  • In het licht van een bloedvat "botsen" lipoproteïnen met HDL, dat apoCII en apoE aan hen overdraagt, en worden "rijpe deeltjes". In dit geval dringen de resulterende vetzuren het weefsel binnen (vetweefsel, spieren en andere), en de Apoc-II lipoproteïne lipase activator gaat weer naar HDL.
  • De deeltjesgrootte van de chylomicron neemt af en het verandert in een residu.
  • Het residu wordt snel geabsorbeerd door de lever als gevolg van receptorbinding van het endotheel met apoE en daaropvolgende endocytose, waar het uiteindelijk afbreekt.
  • Zo zorgt het voor de overdracht van voedsellipiden van de darm naar de lever.

Laten we er wat meer in detail over duiken.

Wat zijn onrijpe, rijpe en overblijvende soorten chylo-microns?

onrijpe chylomicron bestaat uit absorberende cellen in de dunne darm die bekend staan ​​​​als enterocyten. Deze zijn relatief groot met een diameter van 75 tot 1.200 nanometer. Het bestaat voornamelijk uit triglyceriden (85%), cholesterol en cholesterolester. De belangrijkste component van apolipoproteïne is apolipoproteïne-48 B.

In het geval van volwassen chylomicronen, deze circuleren in lymfe en bloed, chylomicron wisselt componenten uit met high-density lipoproteïne (HDL). HDL is apolipoproteïne-II C en apolipoproteïne E levert de initiële chylomicronen, om om te zetten in rijpe chylomicronen. APOC2 is een cofactor voor lipoproteïne lipase (LPL) activiteit.

Chylomicron restant: Wanneer de triglyceridenreserve verbruikt (verdeeld), zet het APOC2 weer om in HDL (dat APOE vasthoudt), waardoor chylomicronenresten van slechts 20-50 nm achterblijven. APOB48 en APOE zijn belangrijk voor de identificatie van chylomicronenresten in de lever als gevolg van endocytose en afbraak.

Laten we vergelijken Chylomicronen met andere termen.

Chylomicron versus VLDL

De chylomicronen zijn grote lipoproteïnen met een extreem lage dichtheid die voedingslipiden van de darm naar weefsels transporteren, terwijl de VLDL, lipoproteïnen met een zeer lage dichtheid, in de lever worden gesynthetiseerd en lipiden naar weefsels transporteren. VLDL verliest triacylglycerolen en sommige apoproteïnen en fosfolipiden in het lichaam.

Chylo-micron en Micellen

Micellen zijn aggregaten van verschillende moleculen. Dit is in de vorm waarin vetzuren, glyceriden en sterolen in de darmcellen worden opgenomen. Ze zijn gemaakt van fosfolipiden, terwijl chylomicronen een soort lipoproteïnen zijn die cholesterol en triglyceriden uit de voeding van de dunne darm naar de lichaamsweefsels transporteren.

Chylo-micron-test

De zogenaamde koelkasttest is een kwalitatieve detectiemethode voor chylomicronen. In het proces, nuchter bloedserum 's nachts bewaren bij 4 ° C. Als er een "crèmelaag" aan de bovenkant ontstaat, wordt dit beschouwd als positief bewijs van chylomicronen. Terwijl homogene troebelheid wijst op een verhoogde concentratie van VLDL.


Karakterisering en discriminatie van de ALP's

Er zijn veel verschillende biochemische en immunologische methoden gebruikt om onderscheid te maken tussen de verschillende ALPS en deze selectief te testen op enzym- en eiwitniveau. Drie algemene methoden zijn bijzonder nuttig gebleken: thermostabiliteitsstudies differentiële remming met verschillende aminozuren, kleine peptiden en andere stoffen met een laag molecuulgewicht en immunologische methoden [39].

Thermostabiliteit

De intestinale en L/B/K ALP's worden snel geïnactiveerd bij temperatuur 㹥 ଌ (tabel  2 ). Daarentegen zijn placentale en placenta-achtige ALPS opmerkelijk thermostabiel. Ze kunnen een uur of langer worden verwarmd tot 65 ଌ zonder verlies van activiteit. Het intestinale ALP is echter iets thermostabieler dan het L/B/K ALP. Er is ook aangetoond dat lever-ALP in serum enigszins, maar significant, thermostabieler is dan bot-ALP [39].

Tafelਂ

Relatieve thermostabiliteit van menselijke ALP's [39]

Tijd in minuten die nodig is om 50 % inactivering van verschillende menselijke ALP's te geven bij 56 ଌ en 65 ଌ

Remmingsstudies

Verschillende stoffen met een laag molecuulgewicht vertonen differentiële remming van de verschillende ALP's. Tabel  3 vat de effecten samen met vijf remmers die veelvuldig zijn gebruikt. De L/B/K ALP's zijn gevoeliger voor remming met l-homoarginine (Har) dan placentale, placenta-achtige of intestinale ALP's. Daarentegen zijn placenta-, placenta-achtige en intestinale ALPS ongeveer 30 keer gevoeliger voor remming met l-fenylalanine (Phe) dan de L/B/K ALP's. r,-Fenylalanyl-glycyl-glycine (Pgg) geeft een scherpe differentiële remming tussen placenta, darm en L/B/K ALP's. Het maakt ook onderscheid tussen placentaal ALP en placenta-achtig ALP, dat met deze remmer meer lijkt op intestinale ALP. l-Leucine (Leu) geeft typisch een veel sterkere remming met placenta-achtige ALP dan met de andere ALP's. Levamisole (Leva) is een bijzonder krachtige remmer van L/B/K ALP, maar heeft weinig remmend effect op de andere ALP's [39].

Tafelਃ

Effecten van verschillende remmers op verschillende Huaman ALP's [19]

remmersALP
L/B/K ALPIntestinaalplacentaPlace-achtige
l-Plenylalanine (Phe)310.81.10.8
l-Homoarginine (Har)2.74036
l -Fenylalanineglycylglycine (Pgg)30.63.70.12.9
l -Leucine (Leu)13.13.65.70.6
Levamisol (Leva)0.036.81.72.7

Concentraties (nmol/l) van verschillende remmers die nodig zijn om onder gestandaardiseerde omstandigheden 50% remming van verschillende humane ALP's te produceren

Immunologische studies

Bij konijnen opgewekte antisera tegen gezuiverd placentaal ALP hebben een kruisreactie met placenta-achtig ALP en intestinaal ALP, maar niet met L/B/K ALP. Aanvullende resultaten worden verkregen met antisera opgewekt tegen intestinale ALP of L/B/K ALP. Deze bevindingen tonen aan dat sommige, maar niet alle, van de antigene determinanten die worden gedetecteerd op placentaal ALP ook aanwezig zijn op intestinale ALP, maar de placentale en placenta-achtige ALP's zijn immunologisch zeer vergelijkbaar. Sommige, maar niet andere monoklonalen, opgewekt tegen placenta- en intestinale ALP's, reageren met beide ALP's en sommige, hoewel niet andere, monoklonalen differentiëren het placenta- en placenta-achtige ALP. Combinaties van deze verschillende biochemische en immunologische technieken zijn gebruikt om methoden te bedenken die nauwkeurige analytische informatie geven over de hoeveelheden van elk van de ALP's wanneer ze samen aanwezig zijn in een weefselextract of lichaamsvloeistof zoals serum of vruchtwater.

l-Fenylalanyl-glycyl-glycine (Pgg) geeft een scherpe differentiële remming tussen placenta, intestinale en L/B/K ALP's. Leva is een bijzonder krachtige remmer van L/B/K ALP, maar heeft weinig remmend effect op andere ALP's. Opgemerkt moet worden dat deze verschillende remmers stereospecifiek en niet-competitief zijn [19].


&alpha2-3,6,8 Neuraminidase

&alpha2-3,6,8 Neuraminidase katalyseert de hydrolyse van &alpha2-3, &alpha2-6 en &alpha2-8 gekoppelde siaalzuurresiduen van glycoproteïnen en oligosachariden.

  • Recombinant enzym zonder detecteerbare endoglycosidase of andere exoglycosidasen die activiteiten vervuilen
  • Werkt op zowel Neu5Ac als Neu5Gc
  • Snelle vertering, verwijdering van siaalzuren in 5 minuten

Neuraminidase is de algemene naam voor Acetyl-neuraminylhydrolase (Sialidase). Dit neuraminidase katalyseert de hydrolyse van &alpha2-3, &alpha2-6 en &alpha2-8 gekoppelde N-acetylneuraminezuurresiduen van glycoproteïnen en oligosachariden.

Substraat Specificiteit:

Productbron:

Geleverde reagentia

De volgende reagentia worden bij dit product geleverd:

&alpha2-3,6,8 Neuraminidase P0720SVIAL -20 1 x 0,04 ml 50.000 eenheden/ml
GlycoBuffer 1 B1727SVIAL -20 1 x 1 ml 10 X

Eenheidsdefinitie

Eén eenheid wordt gedefinieerd als de hoeveelheid enzym die nodig is om > 95% van de terminale &alpha-Neu5Ac te splitsen van 1 nmol Neu5Ac&alpha2-3Gal&beta1-3GlcNAc&beta1-3Gal&beta1-4Glc-7-amino-4-methyl-coumarine (AMC), in 5 minuten bij 37°C in een totaal reactievolume van 10 µl.

Tweevoudige verdunningen van &alpha2-3,6,8 Neuraminidase worden geïncubeerd met 1 nmol AMC-gelabeld substraat en 1X GlycoBuffer 1 in een 10 µl reactie. Het reactiemengsel wordt gedurende 5 minuten bij 37°C geïncubeerd. Scheiding van reactieproducten wordt zichtbaar gemaakt via dunnelaagchromatografie (3).

Reactievoorwaarden

1X GlycoBuffer 1
Incubeer bij 37°C

1X GlycoBuffer 1
5 mM CaCl2
50 mM natriumacetaat
(pH 5,5 @ 25°C)

Opslagbuffer

50 mM NaCl
20 mM Tris-HCl
5 mM EDTA
pH 7,5 @ 25°C

Warmte-inactivatie

Molecuulgewicht

Bijbehorende producten

  1. Roggentin, P. et al. (1988). FEBS Lett. 238(1), 31-34.
  2. Guan, C., New England Biolabs ongepubliceerde waarnemingen.
  3. Wong Madden, ST en Landry, D. (1995). Glycobiologie. 5, 19-28.
  • P0720Datasheet-Lot0131205
  • P0720Datasheet-Lot0141206
  • P0720Datasheet-Lot0141210
  • P0720Datasheet-Lot0151302
  • P0720Datasheet-Lot0141303
  • P0720Datasheet-Lot0151305
  • P0720Datasheet-Lot0151310
  • P0720Datasheet-Lot0151312
  • P0720Datasheet-Lot0151407
  • P0720Datasheet-Lot0151408
  • P0720Datasheet-Lot0171412
  • P0720Datasheet-Lot0151501
  • P0720Datasheet-Lot0151504

Productcitatietool

Specificaties:

  • P0720S_L_v1_0161603
  • P0720S_L_v1_0171609
  • P0720S_L_v1_0171612
  • P0720S_L_v1_0191704
  • P0720S_L_v1_0191707
  • P0720S_L_v1_0201710
  • P0720S_L_v1_0201801
  • P0720L_v1_10010266
  • P0720L_v1_10015145
  • P0720S_v1_10018751
  • P0720S_v1_10026475
  • P0720L_v1_10026474
  • P0720S_v1_10031657
  • P0720L_v1_1044263
  • P0720S_v1_1044262
  • P0720S_v1_11044661
  • P0720L_v1_10054879
  • P0720L_v1_10056317
  • P0720L_v1_10061039
  • P0720S_v1_10062665
  • P0720L_v1_10065575
  • P0720S_v1_10065577
  • P0720L_v1_1075882
  • P0720S_v1_0102998
  • P0720S_v1_10113722
  • P0720Datasheet-Lot0131205
  • P0720Datasheet-Lot0141206
  • P0720Datasheet-Lot0141210
  • P0720Datasheet-Lot0151302
  • P0720Datasheet-Lot0141303
  • P0720Datasheet-Lot0151305
  • P0720Datasheet-Lot0151310
  • P0720Datasheet-Lot0151312
  • P0720Datasheet-Lot0151407
  • P0720Datasheet-Lot0151408
  • P0720Datasheet-Lot0171412
  • P0720Datasheet-Lot0151501
  • P0720Datasheet-Lot0151504

Dit product valt onder een of meer patenten, handelsmerken en/of copyrights die eigendom zijn van of beheerd worden door New England Biolabs, Inc (NEB).

Hoewel NEB haar producten voor verschillende toepassingen ontwikkelt en valideert, kan het voor het gebruik van dit product van de koper zijn dat hij voor bepaalde toepassingen aanvullende intellectuele eigendomsrechten van derden moet verkrijgen.

Neem voor meer informatie over commerciële rechten contact op met het Global Business Development-team van NEB via [email protected]

Dit product is uitsluitend bedoeld voor onderzoeksdoeleinden. Dit product is niet bedoeld voor therapeutische of diagnostische doeleinden bij mensen of dieren.

New England Biolabs (NEB) zet zich in voor het beoefenen van ethische wetenschap en wij geloven dat het onze taak als onderzoekers is om de belangrijke vragen te stellen die, wanneer ze worden beantwoord, zullen helpen onze kwaliteit van leven en de wereld waarin we leven te behouden. Dit onderzoek moet echter altijd op een veilige en ethische manier gebeuren. Kom meer te weten.


Microalgen Nutraceuticals

3.4 Chlorella: De Groene Nutraceutical

De groene cellulaire microalg Chlorella wordt veel verkocht als gezondheidsvoedsel, voedingssupplement en nutraceutical (Morita, 1999). In het Verre Oosten, Chlorella wordt al sinds de oudheid als alternatief medicijn gebruikt. In China en het Oosten wordt deze chlorofyt beschouwd als een traditioneel voedsel dat lijkt op een nutraceutical. Tegenwoordig zijn de microalgen Chlorella wordt geproduceerd en op de markt gebracht als voedingssupplement voor de gezondheid in veel landen, zoals China, Japan, Europa en de Verenigde Staten. De geschatte totale productie is ongeveer 2000 ton/jaar ( Batista et al., 2013 ) gedroogde Chlorella in de Verenigde Staten, Japan, China, Taiwan en Indonesië. Vanwege het gehalte aan voedingsstoffen en positieve gezondheidseffecten, Chlorella wordt beschouwd als een belangrijk functioneel voedsel en nutraceutical. Wat betreft de samenstelling, Chlorella is samengesteld uit 55-60% eiwit, 1-4% chlorofyl, 9-18% voedingsvezels en tal van mineralen en vitamines (Shim et al., 2008). Rapporten over het eiwit van Chlorella onthullen alle essentiële aminozuren die nodig zijn voor de voeding van heterotrofe organismen. De ontgifting van metalen en pesticiden uitgevoerd door: Chlorella wordt geassocieerd met porfyrineringen in de productie van chlorofyl of glutathion door vitamine B12. Chlorella accumuleert ook grote hoeveelheden luteïne, wat in verband is gebracht met de preventie en behandeling van maculaire degeneratie (Shibata et al., 2003). Deze Chlorofyt is ook in staat om het cholesterolgehalte te verlagen en de bloeddruk te verlagen. Het verbruik van Chlorella significant verlaagd de low-density lipoproteïne en het cholesterolgehalte. Zoals in het geval van andere microalgen, Chlorella consumptie als nutraceutisch product kan bijwerkingen vertonen (Gouveia et al., 2007). Van de geregistreerde effecten kan elk commercieel merk een andere reactie bij consumenten hebben, zoals gevallen van gastro-intestinale aandoeningen, misselijkheid en braken. Deze Chlorofyt is geclassificeerd als een zwak allergeen. Figuur 3 toont de verschillende pigmenten in de diverse microalgen nutraceuticals.

Figuur 3 . De belangrijkste pigmenten in microalgen worden gebruikt als Nutraceuticals.


Ministerie van Onderwijs van New Jersey

Het doel van het curriculum voor wetenschappelijk onderwijs is om studenten te produceren die voldoende kennis hebben opgedaan van de praktijken, transversale concepten en kernideeën van wetenschap en techniek om deel te nemen aan openbare discussies over wetenschapsgerelateerde kwesties, om kritische consumenten te zijn van wetenschappelijke informatie met betrekking tot hun leven, en hun leven lang over wetenschap te blijven leren. Ze zouden moeten gaan beseffen dat wetenschap en het huidige wetenschappelijke begrip van de wereld het resultaat zijn van vele honderden jaren van creatieve menselijke inspanningen. Het is vooral belangrijk op te merken dat de bovenstaande doelen voor alle studenten zijn, niet alleen degenen die een loopbaan in de wetenschap, techniek of technologie nastreven of degenen die doorgaan naar het hoger onderwijs (p. 9, NRC, 2012).
Gezien dit doel zou een geïntegreerd wetenschappelijk curriculummodel de vorming van wetenschappelijk curriculum op de middelbare school moeten stimuleren, omdat:

  • De aard van wetenschap is complex en multidisciplinair.
  • Onderzoek naar leertheorie in de wetenschap laat zien dat de kennisbasis van experts zich beter ontwikkelt door interdisciplinaire verbindingen en niet door geïsoleerde inhoud.
  • Effectieve op onderzoek gebaseerde praktijken voor curriculum en instructie in wetenschap en techniek worden ondersteund door deze aanpak.

Aard van de wetenschap

De aard van wetenschap is complex en multidisciplinair. Uit onderzoek over hoe wetenschappers werken, weten we dat wetenschappers niet geïsoleerd werken in hun eigen huis van natuurkunde, biologie of scheikunde, maar dat ze de hand reiken en netwerken creëren van wetenschappers binnen en tussen disciplines die kunnen bijdragen tot begrip, ideeën delen en kritiek leveren bewijzen en verklaringen. Zoals we zien in de wetenschap van wereldwijde klimaatverandering, werken wetenschappers op het gebied van geologie, natuurkunde en biologie om bewijs te leveren, onderzoeken te plannen en modellen te ontwikkelen om nieuwe manieren te vertegenwoordigen om over aardsystemen te denken. Belangrijke praktijken zoals argumenteren op basis van bewijs, modellering en het communiceren van informatie staan ​​niet op zichzelf, maar zijn gebaseerd op feedback van binnen en tussen wetenschappelijke gemeenschappen en disciplines. Door het curriculum van het middelbare schoolmodel te baseren op een geïntegreerd model waarbij de studenten in elke klas betrokken zijn bij een verscheidenheid aan onderwerpen, gericht op het verbinden van ideeën over de domeinen, wordt het interdisciplinaire karakter van wetenschap versterkt.

Leertheorie

In de elementaire jaren bouwen studenten hun begrip van kernconcepten op in alle drie de domeinen van de wetenschap: fysiek, leven en aarde en ruimte. Door dit model in de klassen 6-8 voort te zetten, wordt het leren van studenten beter ondersteund doordat er geen grote tijdsperiode zal zijn waarin een student zich niet bezighoudt met een specifieke discipline. Dit model maakt gebruik van huidig ​​onderzoek dat erkent dat er variatie is tussen kinderen op een bepaalde leeftijd en dat het denken zich niet ontwikkelt volgens een vooraf opgesteld stappenplan voor elke leerling. Het stelt middelbare scholieren in staat voort te bouwen op wat ze weten en denken te begrijpen vanaf hun basisschooljaren met als doel op de middelbare school studenten te helpen hun kennis en begrip over die kernideeën te herzien. Onderzoek naar leertheorie toont aan dat de kennisbasis van experts zich beter ontwikkelt door interdisciplinaire real-world connecties dan door geïsoleerde inhoud. Dit is vooral belangrijk op de middelbare school, waar motivatie cruciaal is voor leren. Een geïntegreerd en beter gearticuleerd wetenschappelijk curriculum voor middelbare scholen dat weerspiegelt wat we momenteel weten over hoe kinderen wetenschap leren en hoe hun beheersing zich in de loop van de tijd ontwikkelt, bevordert dieper leren in de wetenschap. Omdat we weten en begrijpen hoe studenten begrip ontwikkelen tijdens het leren van inhoud, informeert het docenten in de praktijk als docenten begrijpen waar hun studenten staan ​​in hun begrip van kernideeën, en anticiperen op wat de misvattingen en worstelingen van studenten kunnen zijn, ze beter in staat zijn om onderscheid te maken instructie en bieden steigers waarmee studenten een geïntegreerd en dieper begrip van de wetenschap kunnen ontwikkelen.

Op onderzoek gebaseerde wetenschappelijke instructie en curriculum

Effectieve wetenschappelijke instructie kan vele vormen aannemen, maar omvat vergelijkbare componenten. Volgens het rapport van 2010 van het Center on Instruction, Effectieve wetenschappelijke instructie: wat vertelt het onderzoek ons?, op onderzoek gebaseerde effectieve praktijken van curriculum en instructie die belangrijk zijn voor het leren van wetenschap, zijn: motivatie, voorkennis van studenten opwekken, intellectuele betrokkenheid, gebruik van bewijs om beweringen te bekritiseren en zingeving. Het geïntegreerde model is mogelijk beter in staat om sommige van deze instructiepraktijken te ondersteunen, vooral als het curriculum wordt gekaderd rond boeiende, relevante en real-world interdisciplinaire vragen die de motivatie, intellectuele betrokkenheid en zingeving van studenten zullen vergroten. Effectieve wetenschappelijke instructie helpt middelbare scholieren om hun inzichten en praktijken op te bouwen, verbanden te leggen tussen en tussen kernconcepten en praktijken en verbanden te leggen met hun voorkennis. Studenten in de klassen 6-8 leren de natuurlijke wereld op een meer wetenschappelijk nauwkeurige manier te begrijpen en begrijpen de aard van de wetenschap.

Wetenschapscurriculum moet thematisch zijn met een focus op verbindingen tussen en tussen kernconcepten en praktijken. Deze benadering versterkt het interdisciplinaire karakter van wetenschap en zorgt voor een sequentiële progressie van vaardigheden en concepten. Dit ondersteunt ontwikkelingsgericht onderwijs en beoordelingen. Elk leerjaar heeft zijn eigen specifieke normen van elk wetenschapsdomein die worden gezien als stapstenen in de voortgang van het leren over een kernidee en die voldoen aan een specifiek niveau van begrip. Het idee is om technologie en engineering in te bedden in deze interdisciplinaire progressie die ook zou worden gecoördineerd met de Common Core State Standards.
Het modelwetenschapscurriculum voor de klassen K-8 biedt een gemeenschappelijk pad dat enkele van de uitdagingen die een student ervaart wanneer ze tussen scholen of districten in de staat overstappen, verzacht. The model also allows educators from multiple districts in a region to align teaching and learning assessments and professional development. Districts retain their local control over the implementation of a common curriculum. The day to day decisions about how best to meet the specific needs of a student still rest with the local teacher of science and school. The common model for local curriculum development allows school districts to share science curriculum resources, formative and summative assessment items, teacher professional development, and other tools.


Biotin and the biotin-binding proteins

Biotine

Biotin is a vitamin (Vitamin H, Vitamin B7, Coenzyme R) that is present in small amounts in all living cells and is critical for a number of biological processes including cell growth and the citric acid cycle. Biotin is abundant in certain plant and animal tissues such as corn kernels, egg yolk, brain, liver and blood. The valeric acid side chain of the biotin molecule can be derivatized in order to incorporate various reactive groups that facilitate the addition of a biotin tag to other molecules. Because biotin is relatively small (244.3 Daltons), it can be conjugated to many proteins and other molecules without significantly altering their biological activity. The highly specific interaction of biotin-binding proteins with biotin makes it a useful tool in assay systems designed to detect and target biological analytes.

Chemical structure of biotin. Biotin, also known as B-vitamin B7 (formerly vitamin H and coenzyme R) is water soluble. The molecule is comprised of an ureido ring joined with a tetrahydrothiophene ring. Biotin is a coenzyme for carboxylase enzymes and biotin is required for the synthesis of these molecules: fatty acids, isoleucine, and valine. Biotin is also involved in gluconeogenesis.

Once biotin is attached to a molecule, the biotin tag can be used to facilitate affinity purification of that molecule using an immobilized biotin-binding protein. Alternatively, a biotinylated molecule can be immobilized through interaction with a biotin-binding protein, and then used to affinity purify other molecules that specifically interact with it (i.e., co-immunoprecipitation or pull-down assays). In the context of immunohistochemistry and immunoblotting, biotin is most often conjugated to primary or secondary antibodies, and the biotin tag is then detected with a biotin-binding protein that is conjugated to an enzyme, fluorophore or other reporter molecule. Many proteins, such as antibodies, can be labeled with several biotin tags, each able to be bound by a biotin-binding protein. An optimized biotin-to-probe ratio can greatly increase the signal output of a detection system making it possible to create very sensitive assays.

Biotin-labeled antibodies and other molecules are readily available from commercial suppliers making assay development routine for many applications. For assays in which a biotinylated probe is not available, there are many biotinylation reagents that enable researchers to chemically label proteins, nucleic acids and surface materials to make custom assay reagents.