Informatie

12: Gisttransformatie - Biologie


Technieken voor het transformeren van microbiële organismen met vreemd DNA zijn essentieel in de moderne moleculaire biologie. In dit laboratorium,
jij zal een transformeren S. cerevisiae ontmoet stam met drie verschillende plasmiden en gebruik ura3complementatie om getransformeerde te detecteren
cellen. U zult dan replicaplating gebruiken om te bepalen of: S. pombe Met genen zijn functioneel equivalent aanS. cerevisiae MET genen.


Doelen

Aan het einde van dit lab moeten studenten in staat zijn om:

  • de processen van transformatie en complementatie op moleculair niveau uitleggen.
  • een selectiestrategie ontwerpen om getransformeerde stammen te isoleren
  • transformeren S. cerevisiae met plasmiden en isoleer transformanten op selectieve media
  • gebruik replica-plating om het vermogen van plasmide-gecodeerd te analyseren LEERDE KENNEN genen om aan te vullen leerde kennen tekortkomingen

In dit experiment kun je een voorlopig antwoord krijgen op de onderzoeksvraag van het semester over de functionele conservering van Met-eiwitten in de Ascomycota. Tijdens het eerste deel van het semester gebruikte je team selectieve uitplating en kolonie-PCR om gistdeletiemutanten te identificeren. Vervolgens heb je plasmiden geïsoleerd en gekarakteriseerd die kunnen worden gebruikt om Met-eiwitten tot overexpressie te brengen. Deze twee reeksen experimenten komen samen in dit lab, wanneer je de S. cerevisiae deletiestam met de expressieplasmiden. Door middel van een reeks complementatie-experimenten, zal je bepalen of de genen die op de plasmiden worden gedragen, in staat zijn om de ontbrekende LEERDE KENNEN genen in de mutanten. Als aanvulling herstelt het geïntroduceerde gen het normale fenotype van een mutant met een defect gen.


Bekijk de video: Rekombination bei Bakterien - Transduktion, Transformation u0026 Konjugation einfach erklärt - Genetik (November 2021).