Informatie

16.6: Glycoproteïnen - Biologie


Membraaneiwitten zijn vaak covalent gekoppeld aan oligosachariden, die vertakt zijn glycoside-gebonden suikers (gemiddeld ongeveer 15 suikerresten). Als glycanen, het zijn de suikers waaraan glycoproteïnen. Glycoproteïnen zijn zeldzaam in het cytosol, maar komen vaak voor op uitgescheiden en membraaneiwitten. Oligosachariden zijn typisch gekoppeld aan eiwitten via de hydroxylgroep op serine of threonine. Incidentele koppelingen zijn aan gemodificeerde aminozuren zoals: hydroxylysine of hydroxyproline (O-glycosylering), en de amidestikstof op asparagine (N-glycosylering). De oligosacharidedomeinen van glycoproteïnen spelen vaak een belangrijke rol bij de functie van membraaneiwitten. Zo zijn bijvoorbeeld de glycoproteïnen, samen met de polaire domeinen van integrale en perifere eiwitten en glycolipiden, een belangrijk kenmerk van de glycocalyx. Een celmembraan en zijn glycocalyx worden hieronder geïllustreerd.

Oligosachariden beginnen hun synthese in het ruw endoplasmatisch reticulum (RER), met de vorming van a kern glycoside. Gedeeltelijk glycanen zijn enzymatisch gekoppeld aan compatibele aminozuren van een membraaneiwit. Terwijl deze eiwitten door de Golgi-blaasjes van de endomembraan systeem, terminale glycosylering hecht meer suikers aan het kernglycoside om de glycoproteïnesynthese te voltooien. Wanneer blaasjes die uit de transGolgi-blaasjes komen samensmelten met het plasmamembraan, komen de suikers op de glycoproteïnen op het buitenste celoppervlak terecht. Dit wordt geïllustreerd in onderstaande link.


De identificatie van met macrofagen verrijkte glycoproteïnen met behulp van Glycoproteomics

Prostaatkanker is een belangrijke oorzaak van kankergerelateerde sterfgevallen bij mannen in de Verenigde Staten. Terwijl de gelokaliseerde ziekte goed te behandelen is door chirurgische resectie en bestraling, blijft uitgezaaide kanker ongeneeslijk. Immuuncellen die voornamelijk puin opruimen en angiogenese en wondherstel van prostaatkanker bevorderen, zijn M2-macrofagen. Ze zijn fenotypisch vergelijkbaar met M2-tumor-geassocieerde macrofagen (M2-TAM's) en er is gemeld dat ze associëren met solide tumoren en helpen bij proliferatie, metastase en resistentie tegen therapie. Als een invasieve soort in de micro-omgeving van tumoren, maakt dit M2-TAM's een ideaal therapeutisch doelwit bij prostaatkanker. Om nieuwe oppervlakteglycoproteïnen te identificeren die tot expressie worden gebracht op M2-macrofagen, hebben we een nieuwe methode ontwikkeld om homogene populaties van menselijke macrofagen te creëren uit menselijke CD14 + monocyten in vitro Deze homogene M1-macrofagen scheiden pro-inflammatoire cytokinen af, en onze M2-macrofagen scheiden ontstekingsremmende cytokinen af, evenals vasculaire endotheliale groeifactor (VEGF). Om verrijkte oppervlakte-glycoproteïnen te identificeren, hebben we vervolgens vaste-fase-extractie van uitgevoerd N-gekoppelde glycopeptiden gevolgd door vloeistofchromatografie-tandem massaspectrometrie (LC-MS/MS) op onze homogene macrofaagpopulaties. We ontdekten vijf nieuwe peptiden die exclusief verrijkt zijn op menselijke M2-macrofagen in vergelijking met menselijke M1-macrofagen en menselijke CD14+-monocyten. Ten slotte hebben we bepaald of deze oppervlakte-glycoproteïnen, verrijkt op M2-macrofagen, ook tot expressie werden gebracht in menselijke metastatische castratieresistente prostaatkanker (mCRPC) weefsels. Met behulp van mCRPC-weefsels van snelle autopsies waren we in staat om M2-macrofaaginfiltratie te bepalen met behulp van immunohistochemie en flowcytometrie. Deze bevindingen benadrukken de aanwezigheid van macrofaaginfiltratie in menselijke mCRPC, maar ook oppervlakteglycoproteïnen die kunnen worden gebruikt voor de prognose van gelokaliseerde ziekte en voor targetingstrategieën.

© 2017 door The American Society for Biochemistry and Molecular Biology, Inc.

Belangenconflict verklaring

De auteurs verklaren dat ze geen belangenconflicten hebben met de inhoud van dit artikel


Dagelijkse variaties in traanglycoproteïnen: bewijs voor een epitheliale oorsprong voor de belangrijkste niet-reduceerbare = 450 kDa sialoglycoproteïne(n)

DOEL. Karakteriseren van de aard en oorsprong van veranderingen in traanglycoproteïnen die gepaard gaan met oogsluiting. METHODEN. Reflex (R) en 's nachts gesloten (C) oogtranen verzameld door capillaire buisjes werden gecentrifugeerd met de resulterende R-pellets (voornamelijk afgeschilferde epitheelcellen) en C-pellets (voornamelijk PMN en sommige epitheelcellen) geëxtraheerd in zure PBS. Extracten en supernatanten werden gescheiden door HPLC met uitsluiting van grootte en/of SDS-PAGE. Gels werden gekleurd of geblot en immuun- of lectine-gesondeerd. Een HPLC-glycoproteïnefractie van -450 kDa geïsoleerd uit alle vier de bronnen werd gekarakteriseerd voor en na gedeeltelijke deglycosylering, met behulp van antilichamen die specifiek zijn voor bekende mucine- en koolhydraatepitopen. Immunofluorescentiemicroscopie werd uitgevoerd op menselijke conjunctiva, met als sonde een MAb voor speekselmucine specifiek voor een sialyl Le a-epitoop, waarvan werd gevonden dat het specifiek kruisreageerde met de belangrijkste niet-reduceerbare sialoglycoproteïnen (SG's) met hoog molecuulgewicht in tranen. Deze SG's werden geïmmunoprecipiteerd en blot-gesondeerd samen met weefselextracten. RESULTATEN. R-vloeistof bevatte kleine hoeveelheden van talrijke glycoproteïnen, waaronder waarschijnlijk verschillende van induceerbare traanafscheidingsoorsprong. Resultaten bevestigden sIgA als de belangrijkste bron van de intense reduceerbare glycoproteïnebanden die gemeenschappelijk zijn voor C-vloeistof. Kleinere hoeveelheden vrije secretoire component en serumglycoproteïnen werden ook gevisualiseerd. De HPLC-fractie (=450 kDa) bestond uit vier belangrijke niet-reduceerbare glycoproteïnen. In R-vloeistof bestond deze fractie (&lt1% totaal eiwit) voornamelijk uit twee entiteiten: een SG van 450-500 kDa en een groter asialoglycoproteïne. De SG is goed voor maar liefst 85% van het totale eiwit in het R-pelletextract. C-vloeistof was geassocieerd met een selectieve toename van SG's en een verschuiving in distributie naar twee SG's &gt500 kDa. Alle SG's vertoonden een gemeenschappelijke antigeniciteit die specifiek reageerde met het MAb voor het sialyl Lea-epitoop. SG's die niet te onderscheiden waren in grootte en antigeniciteit werden teruggevonden in epitheliale extracten. Immunofluorescentiemicroscopie onthulde dat de reactiviteit gelokaliseerd was op het epitheliale plasmamembraan en in intensiteit toenam van basale naar apicale cellen. Hoewel deze SG's enkele eigenschappen gemeen hebben met MUC1, suggereren immunologische en andere gegevens een unieke SG. CONCLUSIES. Traanglycoproteïnen zijn afgeleid van vier hoofdbronnen. In R-vloeistof overheerst een induceerbare traanafscheiding. In C-vloeistof overheerst een constitutieve sIgA-secretie, aangevuld met een serumexsudaat en SG's die ten minste gedeeltelijk uit het epitheel zijn afgeleid. In extracten van R-vloeistof en pellets bestaan ​​de SG's voornamelijk uit een soort van 450-500 kDa die hoogstwaarschijnlijk is afgeleid van het plasmamembraan. Grotere antigeen verwante SG's komen veel voor in C-vloeistof.


Antimicrobiële loodverbindingen van mariene planten

17.1.1.5.5 Glycoproteïnen

Glycoproteïnen zijn een grote klasse van biomoleculen, aanwezig in celmembranen. Glycoproteïne-glycoconjugaten hebben een eiwitskelet waaraan verschillende monosachariden covalent zijn gehecht. Glycoproteïnen bevatten N- gekoppelde suikerketens (GlcNAc-groep aan reducerend uiteinde bevestigd aan amidegroep van asparagineresidu van polypeptideruggengraat) en O-gekoppelde suikerketens (GalNAc bij reducerende nd, gehecht aan hydroxylgroep van serine (Ser) of threonine (Thr) groepen van polypeptideruggengraat) [114] .

Glycoproteïnen werken als receptoren die liganden vangen in cellen zoals transporteiwitten die verantwoordelijk zijn voor de opname van voedingsstoffen, structuren die moleculaire herkenning, moleculaire signalering en cellulaire interacties mediëren [99].

Mannose-specifieke lectine van groene algen Halimeda renschii vertoonde sterke activiteit tegen influenzavirus vanwege hoge affiniteitsbinding aan hemagglutinines op enveloppen van virussen [115].


Glycoproteïnen en proteoglycanen

2. Wat zijn aldohexosen? Wat zijn de drie belangrijkste aldohexosesuikers voor de mens?

3. Wat is de relatie tussen de drie aldohexosen?

2. Veel koolhydraten zijn derivaten van drie suikers die worden beschouwd als aldohexosen (aldehydesuikers met 6 koolstofatomen), glucose, mannose en galactose.
3. Deze suikers zijn identiek in empirische formule en in het soort substituenten op elk koolstofatoom (wat betekent dat het per definitie stereo-isomeren zijn, verbindingen die alleen verschillen in de ruimtelijke rangschikking van de substituentgroepen).

1. Wat zijn gemodificeerde suikers?

2. Wat zijn de belangrijkste gemodificeerde suikers?

3. Wat zijn de gebruikelijke hexosamines van dierlijke cellen?

2. De belangrijkste gemodificeerde suikers zijn hexosamines, waarbij het atoom op C-2 is vervangen door stikstof.

3. De gebruikelijke hexosamines van dierlijke cellen zijn D-glucosamine en D-galactosamine.

2. Wat is een voorbeeld van een homodisacharide?

3. Wat is een voorbeeld van een heterodisacharide?

4. Hoe zijn suikers met elkaar verbonden? Wat helpt bij de koppeling van suikermoleculen?

5. Hoeveel soorten glycosidische bindingen zijn er geïdentificeerd? Wat suggereert dit?

2. Maltose is een homodisacharide die bestaat uit twee glucosemoleculen

3. Lactose is heterodisaccharide, bestaande uit 1 galactose en 1 glucose.

4. Suikers zijn aan andere suikers gekoppeld via glycosidische bindingen, een reactie die wordt ondersteund door specifieke glycosyltransferasen, enzymen met een strikte specificiteit.

5. Er zijn ten minste 40 soorten glycosidische bindingen geïdentificeerd, wat suggereert dat suikerstructuren specificiteit in interactie kunnen geven.

1. Wat zijn de fysieke kenmerken van de koolhydraatketens?

2. Wat is de hoeveelheid koolhydraatketens die typisch aanwezig is in een glycoproteïne?

3. Wat zijn de distributie-/aanhechtingskenmerken van koolhydraten op glycoproteïnen?

4. Hoe kan de structuur van glycoproteïne variëren tussen verschillende soorten?

5. Wat zijn enkele kenmerken van glycosylering in biologische systemen? Hoe is het geregeld?

2. Glycoproteïnen kunnen slechts een paar koolhydraatketens bevatten of zo veel dat ze meer dan de helft van de massa van een molecuul uitmaken.

3. De koolhydraten kunnen gelijkmatig over de keten worden verdeeld of geconcentreerd. Koolhydraten zijn op een of meerdere punten vastgehecht en er zijn meestal minder dan 12-15 suikers op elk punt, hoewel er in sommige gevallen slechts één enkele suiker kan zijn.

4. Een glycoproteïne van verschillende soorten kan dezelfde eiwitsequentie hebben, maar een variabele koolhydraatsamenstelling.

5. Glycosylering in biologische systemen is enorm complex: een groot aantal koolhydraatstructuren wordt gevonden op celoppervlakken en op meerdere glycosyleringsplaatsen op glycoproteïnen. De biosynthese van oligosachariden is niet matrijsgestuurd (in tegenstelling tot de lineaire macromoleculen DNA en eiwitten) - maar dit betekent niet dat glycosylering niet sterk gereguleerd is of dat het niet belangrijk is voor de biologische functie van het molecuul.

1. Hoe zijn koolhydraten gekoppeld aan eiwitten?

2. Er zijn drie soorten glycopeptidebindingen beschreven:

1. In welke soorten biologische processen speelt glycosylering een belangrijke rol?

2. Hoe beïnvloedt glycosylering de oligosachariden op het celoppervlak gedurende de levensduur van de cel? Welk niveau van regulering is vereist?

2. Oligosacchariden op het celoppervlak ondergaan complexe veranderingen tijdens cellulaire ontwikkeling, differentiatie en activering en nauwkeurige regulering van de dynamische veranderingen in glycosyleringspatronen is essentieel voor het normaal optreden van deze gebeurtenissen.

1. Bloedgroepstoffen voorbeeld

1. Welke effecten kunnen veranderingen in de glycosylering van biofarmaceutische middelen hebben bij patiënten? Wat zijn enkele voorbeelden van sommige medicijnen die deze bijwerkingen kunnen vertonen?

2. rhEPO (recombinant humaan erytropoëtine) wordt gebruikt voor de behandeling van patiënten met anemie als gevolg van chronisch nierfalen (voordat rhEPO, 1988, beschikbaar was, was de enige behandelingsoptie herhaalde transfusies). Er zijn drie N-gebonden glycosyleringsplaatsen en één O-gebonden. Er is vastgesteld dat de biologische activiteit van rhuEPO afhankelijk is van de N-glycosyleringen. Momenteel zijn er onderzoeken gaande waar EPO wordt gemodificeerd, waarbij de eiwitruggengraat wordt gemuteerd om 5 potentiële N-glycosyleringsplaatsen te bevatten - onderzoeken tonen aan dat dit recombinante eiwit meer biologische activiteit heeft.

1. Wat vereist degradatie?

2. Wat zijn exoglycosidasen? Wat doen ze?

3. Wat houdt de primaire afbraakroute in?

2. Exoglycosidasen verwijderen suikers opeenvolgend van het niet-reducerende uiteinde, waardoor het substraat voor het daaropvolgende glycosidase wordt blootgelegd.

3. De primaire afbraakroute is in lysosomen. Er zijn ook specifieke ER-glycosidasen die betrokken zijn bij de verwerking van glycoproteïnen tijdens de synthese.

1. Hoeveel ziekten worden geclassificeerd als LSD's? Wat veroorzaakt ze?

2. Hoe vaak komen deze ziekten voor?

3. Wat zijn enkele kenmerken van LSD's? Hoe ernstig zijn ze? Hoe presenteren ze?

2. Terwijl individueel de meeste van deze
ziekten zijn zeldzaam, als groep is hun incidentie ongeveer 1 op 7.700 levendgeborenen.
3. De meeste LSD's kunnen zich voordoen over een continuüm van klinische ernst. Ze zijn allemaal progressief van aard en kunnen multisystemische, onomkeerbare schade veroorzaken die bij ernstige fenotypen ernstig invaliderend en zelfs levensbedreigend kan zijn. Vroegtijdige identificatie en diagnose zijn dus essentieel.

1. Waar is deze ziekte een voorbeeld van?

2. Wat is het metabole defect dat bij deze ziekte wordt aangegeven?

3. Beschrijf de biochemie van deze ziektetoestand.

2. Bij deze "aangeboren stofwisselingsfout" is het metabolische defect een UDP-N-acetylglucosamine-l-fosfotransferasedeficiëntie.

3. Tijdens de synthese van glycoproteïnen bestaan ​​er verschillende verwerkingsroutes die de uiteindelijke diversiteit van de glycoproteïnen bepalen, evenals hun uiteindelijke handel. Bijvoorbeeld, op glycoproteïnen die bestemd zijn voor het lysosomale compartiment (zoals lysosomale enzymen, zure hydrolasen) wordt het Man8 GlcNAc2-Asn N-glycaan gemodificeerd door de toevoeging van een GlcNAc-residu gekatalyseerd door een GlcNac-fosfotransferase, en daaropvolgende verwijdering door GlcNac fosfodiësterglycosidase, waardoor een Man-6-P-residu wordt blootgelegd. Dit residu fungeert als een specifieke herkenningsmarker die de zure hydrolasen naar de lysosomen richt.

1. Hoeveel koolhydraten bevatten ze?

2. Waar lijken hun eigenschappen meer op? Polysachariden of eiwitten?

3. Hoe heten hun koolhydraatketens?

4. Wat is een oudere naam voor proteoglycanen? Waarom is dit relevant?

5. Wat is de boodschap om mee naar huis te nemen van de biochemische samenstelling van proteoglycanen?

6. Hoeveel klassen glycosaminoglycanen zijn er bekend?

7. Waaruit bestaan ​​de GAG-ketens?

8. Wat zijn andere veel voorkomende bestanddelen van proteoglycanen?

9. Wat draagt ​​bij aan de hoge anionische lading van proteoglycanen?

10. Wat helpt bij de rol van proteoglycanen als smeermiddelen?

2. Hun eigenschappen lijken meer op die van polysachariden dan op eiwitten.

3. Hun koolhydraatketens worden glycosaminoglycanen (GAG's) genoemd.

4. Een oudere naam, mucopolysacchariden, is niet meer in gebruik (behalve in
"mucopolysacharidoses").

5. Proteoglycanen zijn polyanionische stoffen met een hoog molecuulgewicht die bestaan ​​uit veel verschillende glycosaminoglycaanketens die aan een eiwitkern zijn gekoppeld.

6. Er zijn zes verschillende klassen van glycosaminoglycanen bekend.

7. De lange onvertakte heteropolysacharideketens bestaan ​​grotendeels uit herhalende disacharide-eenheden.

8. Andere veel voorkomende bestanddelen zijn sulfaatgroepen, verbonden door esterbindingen aan bepaalde monosachariden of door amidebindingen aan de aminogroep van glucosamine.

9. De carboxyl van uronzuren en sulfaatgroepen dragen bij aan de hoge anionische lading.

10. Zowel de elektrische lading als de macromoleculaire structuur helpen bij hun rol als smeermiddelen en ondersteunende elementen in bindweefsel.

1. Waaruit bestaan ​​GAG's?

2. Wat zijn enkele andere bestanddelen van GAG's?

3. Wat draagt ​​bij aan de polyanionische aard van GAG's?

4. Hoe zijn GAG's gerelateerd aan eiwitten? Wat is de regel en wat is de uitzondering?

2. Andere bestanddelen van glycosaminoglycanen zijn sulfaatgroepen, hetzij door esterbindingen aan de suikerresten of door amidebindingen aan de aminogroep van glucosamine gekoppeld.

3. De carboxylgroepen van de uronzuren en de sulfaatgroepen dragen bij aan de sterk polyanionische aard van glycosaminoglycanen.

4. Elke GAG ​​is covalent gekoppeld aan een eiwit, waardoor proteoglycanen worden gevormd. Uitzondering: hyaluronzuur, dat niet gesulfateerd is en waarvan niet is aangetoond dat het covalent gebonden is aan eiwit.

1. Eerste type: waar hebben ze interactie mee? Wat is een voorbeeld?

2. Tweede type: hoe worden ze ook wel genoemd? Waar hebben ze interactie mee?

2. De kleine leucine-rijke proteoglycanen, ook wel "fibrilaire proteoglycanen" genoemd omdat sommige van hen interageren met fibrilaire collagenen

1. Wat zijn enkele kenmerken van hyaluronaat? Welke andere biologische systemen produceren hyaluronaat? Waarvan is hyaluronaat een copolymeer?

2. Waarin wordt het geclassificeerd? Waarom? Hoe groot kan hyaluronaat zijn?

3. Wat is een hoofdfunctie van hyaluronaat? Wat is hiervan een klinisch voorbeeld?

2. Het is geclassificeerd als een glycosaminoglycaan omdat het vergelijkbaar is met de andere polymeren in termen van herhalende disaccharide-eenheden van N-acetylglucosamine en glucuronzuur. Hoewel hyaluronaat het minst complex is, kunnen de ketens massa's van 10^5 tot 10^7 bereiken.

3. Een van de belangrijkste functies is om te dienen als smeermiddel en schokdemper en wordt meestal aangetroffen in gewrichtsvloeistof, glasvocht en navelstreng. Klinisch voorbeeld: HA wordt intra-articulair toegediend in het gewricht om artrose te behandelen.

2. Hoe worden CS bevestigd? Wat zijn de kenmerkende herhalende eenheden? Hoe zijn ze bevestigd?

3. Hoe worden de disachariden gemodificeerd? In welke positie worden ze normaal gewijzigd?

4. Hoeveel disacharide-eenheden bevat elke polysacharideketen?

5. Hoe groot is een gemiddeld CS-proteoglycaanmolecuul? Hoeveel kettingen bevat het?

6. Hoe variabel zijn deze PG's? Waarmee kunnen ze aggregeren? Wat vormt deze aggregatie?

2. CS zijn gehecht aan specifieke Ser-residuen via een tetrasacharidebinding.
GlcUA→Gal→Gal→Xyl→O-Ser

De karakteristieke herhalende disaccharide-eenheden van N-acetylgalactosamine en glucuronzuur zijn covalent aan dit bindingsgebied gehecht.
3. De disachariden kunnen worden gesulfateerd op de 4 of 6 positie van N-acetylgalactosamine.

4. Elke polysacharideketen bevat tussen de 30 en 50 van dergelijke disaccharide-eenheden, overeenkomend met een grootte van 15 tot 10.000 dalton.
5. Een gemiddeld CS-proteoglycaanmolecuul heeft ongeveer 100 CS-ketens en een massa van 1,5 tot 2 miljoen.

6. Proteoglycaanpreparaten zijn extreem heterogeen en verschillen in lengte van eiwitkern, substitutiegraad, verdeling van polysacharideketens, lengte van CS-ketens en mate van sulfatering. Van CS-proteoglycanen is ook aangetoond dat ze niet-covalent aggregeren met hyaluronaat, waardoor veel grotere structuren worden gevormd, b.v. aggrecan.

1. Hoe verschilt heparine van andere GAG's? Waar bestaat het structureel uit? Wat voor soort koppelingen bevat het?

1. Waarin verschilt HS van andere GAG's? Hoe verhoudt het zich tot of verschilt het van een ander prominent GAG-type?

1. Wat is heparine? Waarom is dit belangrijk? Waar wordt heparine klinisch voor gebruikt?

1. In hoeveel vormen bestaat KS?

2. Wat is het eerste type? Waar wordt het gevonden? Waar is het aan gekoppeld?

1. Wat zijn dat? Waar worden ze door gekenmerkt?

1. Waar zijn ze voorbeelden van?

2. Hoe worden ze overgedragen?

3. Wat zijn kenmerken van elk syndroom?

2. Het syndroom van Hurler en het syndroom van Sanfilippo worden autosomaal recessief overgedragen, terwijl het syndroom van Hunter X-gebonden is.

3. Zowel het Hurler- als het Hunter-syndroom worden gekenmerkt door skeletafwijkingen en mentale retardatie, die in ernstige gevallen kunnen leiden tot vroegtijdig overlijden. Daarentegen zijn bij het Sanfilippo-syndroom de lichamelijke gebreken relatief mild, terwijl de mentale retardatie ernstig is.

1. Wat veroorzaakt het syndroom van Morquio? Wat zijn enkele soorten die zijn geïdentificeerd? Wat veroorzaakt elk type?

2. Hoe is de afbraak van PG's onderzocht?

3. Wat zijn de belangrijkste PG's in verschillende biologische omgevingen?

1. Welke functies worden uitgevoerd door gewrichtskraakbeen?

2. Wat zijn enkele kenmerken van kraakbeen?

3. Hoe heten de cellen in kraakbeen? Wat zijn deze cellen? Wat doen ze? Hoe verhouden ze zich tot naburige cellen?

4. Wat vormt het grootste deel van het gewicht van kraakbeenweefsel? Wat is het percentage van dit materiaal?

5. Wat is het droge gewicht van kraakbeenweefsel? In welke verhoudingen?

6. Waardoor ontstaan ​​de bijzondere materiaaleigenschappen van kraakbeen?

7. Wat is het belangrijkste eiwit in kraakbeen? Hoeveel van het droge gewicht van het weefsel vertegenwoordigt het? Welke eigenschap geeft het dit weefsel?

8. Wat is de meest voorkomende PG in kraakbeen? Welk percentage van zijn drooggewicht vormt deze PG?

9. Wat bindt aan de PG's van 8? Waarom is dit belangrijk?

10. Welke andere vezels zitten er in kraakbeen?

11. Wat zijn enkele andere kleine PG's die in kraakbeen worden aangetroffen?

3. De cellen in kraakbeen worden chondrocyten genoemd. Het zijn secretoire cellen die een overvloedige extracellulaire matrix produceren. Elke chondrocyt is geïsoleerd van de andere en behoudt zijn eigen matrix.

4. Het kraakbeenweefsel bevat ongeveer 70% van zijn gewicht als water.

5. Chondrocyten vertegenwoordigen 5%, terwijl hun extracellulaire matrix ongeveer 95% van het droge gewicht van het weefsel uitmaakt.

6. De bijzondere materiaaleigenschappen van dit weefsel zijn te danken aan de eiwit- en polysacharide-macromoleculen in het kraakbeenweefsel.

7. Collageen (type II) is het belangrijkste eiwit in kraakbeen. Het vertegenwoordigt ongeveer 80% van het drooggewicht van het weefsel en geeft het weefsel zijn treksterkte.

8. Het proteoglycaan, aggrecan, is het meest voorkomende polysacharide in kraakbeen en is ongeveer 20% van het droge gewicht.

9. Hyaluronzuur bindt veel aggrecan-moleculen en dit grote complex houdt water vast in kraakbeen en geeft kraakbeen zijn samendrukkende kracht.

10. Kraakbeen bevat ook kleine hoeveelheden van andere collageentypen IX, XI, VI, III en X.
11. Kraakbeen bevat ook kleine hoeveelheden andere kleine proteoglycanen, decorine, biglycan, fibromoduline waarvan sommige binden aan collageen en ook binden aan belangrijke cytokinen zoals TGF.


Pseudogetypeerde ΔG-DsRed (G*ΔG-DsRed) rVSV

&DeltaG-DsRed is een replicatiebeperkt, recombinant vesiculair stomatitisvirus (rVSV) dat kan worden gebruikt om pseudotype virussen te produceren die de envelopglycoproteïnen bevatten van een grote verscheidenheid aan heterologe virussen, waaronder virussen die BSL-3 of BSL-4 biocontainment vereisen. omdat de besmettelijkheid van rVSV- & DeltaG-pseudotypen beperkt is tot een enkele replicatieronde, kunnen de pseudotypen worden behandeld met behulp van BSL-2-inperkingspraktijken. Deze eigenschappen, samen met de snelle replicatiekinetiek van rVSV- & DeltaG-pseudotypen, zijn nuttig gebleken in onderzoeken die zijn ontworpen om cellulaire receptoren voor talrijke virussen te identificeren, en ze bieden ook een robuust platform om bibliotheken te screenen op ingangsremmers en om de neutraliserende antilichaamreacties na vaccinatie [1].

Wanneer u dit reagens bestelt, wordt een flacon met VSV-G pseudotyped &DeltaG-DsRed (G*&DeltaG-DsRed) verzonden die direct kan worden gebruikt om pseudotypen te genereren die uw envelopeiwit naar keuze bevatten door de procedures te volgen die worden beschreven in [1]. Infectie van cellen met G*&DeltaG-DsRed resulteert in detecteerbare DsRed-fluorescentie binnen 4-6 uur na infectie en zeer heldere DsRed-fluorescentie 12-18 uur na infectie. Infectiviteit kan worden gekwantificeerd door fluorescentiemicroscopie of flowcytometrie. Omdat G*&DeltaG-DsRed een enkele infectieronde ondergaat, vertegenwoordigt elke DsRed-positieve cel één infectieuze eenheid virus. Het wordt aanbevolen dat de gebruiker ook het plasmide pCAGGS-G bestelt, dat wordt gebruikt om extra werkvoorraden van G*&DeltaG-DsRed te genereren.

Het is de verantwoordelijkheid van de hoofdonderzoeker om goedkeuring te verkrijgen van de Institutionele Bioveiligheidsveiligheidscommissie voor gebruik van recombinant DNA, transgene dieren of infectieuze agentia in hun laboratoriumruimten en om een ​​goedkeuring van de Institutionele Bioveiligheidsveiligheidscommissie te behouden gedurende de periode dat deze materialen worden gebruikt.

Uit het laboratorium van Michael A. Whitt, Ph.D., Universiteit van Tennessee.

Amerikaanse klanten - De USDA APHIS VS 16-6- of 16-6A-vergunning moet worden verkregen en een kopie van de vergunning moet hier vóór verzending naar Kerafast worden gestuurd. Het Aanvraagformulier VS 16-3 (Import controlled material import or transport organismen of vectors) moet worden ingediend bij USDA APHIS Veterinary Services om de VS 16-6 of 16-6A vergunning te verkrijgen.

Niet-Amerikaanse klanten - Een BIS-vergunning is mogelijk vereist om dit product te verzenden. Neem contact met ons op voor meer informatie

Product type: Virus Bioveiligheidsniveau: BSL-2 Vectorinformatie: G*&DeltaG-DsRed werd gewonnen met behulp van het VSV reverse genetics-systeem zoals beschreven in [1] uit de plasmiden pVSV-&DeltaG-DsRed, pBS-N-&PhiT, pBS-P-&PhiT, pBS-G-&PhiT en pBS-L- &PhiT. Na herstel werd een plaque-isolaat (plaques kunnen worden verkregen op cellen die VSV-G tijdelijk tot expressie brengen) geamplificeerd op BHK-21-cellen die waren getransfecteerd met pCAGGS-G. Secundaire werkvoorraden werden gegenereerd door het infecteren van BHK-21-cellen die waren getransfecteerd met pCAGGS-G bij lage multipliciteit (MOI = 0,1) en getitreerd op BHK-21-cellen. Virus: VSV-G pseudogetypeerd &DeltaG-DsRed (G*&DeltaG-DsRed) titer: &ge 6x10e8 IE/ml serotype: Indiana/San Juan Inentingsvoorwaarden: Om pseudotypen te genereren met heterologe envelopglycoproteïnen, worden cellen (BHK-21 of HEK-293) eerst getransfecteerd met een plasmide dat het glycoproteïne van keuze tot expressie brengt en

24 uur later geïnfecteerd met G*&DeltaG-DsRed bij een veelvoud (MOI) van

3 tot 5. Om werkvoorraden van G*&DeltaG-DsRed te genereren, worden cellen die zijn getransfecteerd met pCAGGS-G geïnfecteerd met G*&DeltaG-DsRed bij een lage multipliciteit (MOI = 0,1) en worden kweeksupernatanten geoogst


Wat is een glycoproteïne? (met foto)

Een glycoproteïne is een molecuul dat zowel een eiwitgedeelte als ten minste één koolhydraatgedeelte bevat. Glycoproteïnen komen veel voor in de biologie en vervullen verschillende functies. Enkele voorbeelden van hun individuele functies zijn als structurele celcomponenten, enzymen of hormonen.

Koolhydraten zijn een klasse van moleculen in de organische chemie en biologie. De klasse bevat veel moleculen, maar ze bevatten allemaal alleen koolstof-, waterstof- en zuurstofatomen. Eiwitten daarentegen zijn opgebouwd uit verschillende bouwstenen die aminozuren worden genoemd. Aminozuren bevatten stikstof, wat ze onderscheidt van koolhydraten.

Elk glycoproteïne bevat een eiwit en een of meer koolhydraattoevoegingen. Verschillende glycoproteïnen hebben verschillende verhoudingen van koolhydraten tot eiwitten, waarbij de massa van de koolhydraten minder dan 1 procent tot ongeveer 80 procent van het eindproduct in beslag neemt. De plaatsing van de koolhydraten stelt wetenschappers ook in staat om de glycoproteïnen in twee groepen te splitsen. De ene groep zijn de O-gebonden glycanen, waarbij het koolhydraat vastzit aan de aminozuren threonine of serine op het eiwit. De andere is de N-gebonden glycanen, waarbij het koolhydraat is gehecht aan een asparagine-aminozuur.

Menselijke cellen bouwen aanvankelijk een eiwitbasis op in de cel in een structuur die het endoplasmatisch reticulum wordt genoemd. Nadat het eiwit is gemaakt, komt het vrij uit het endoplasmatisch reticulum en beweegt het door de cel naar een andere structuur die bekend staat als het Golgi-apparaat. De celmachinerie voegt tijdens deze reis en bij het Golgi-apparaat verschillende koolhydraatporties toe aan de basiseiwitstructuur.

Zodra het glycoproteïne compleet is, kan het zijn functie uitoefenen. Een subset van glycoproteïnen steekt uit de celwand en werkt als receptoren voor andere moleculen. Ze kunnen ook helpen cellen aan elkaar te plakken om een ​​sterk weefsel te vormen, zoals kraakbeen. Menselijke bloedgroepen A, B en O zijn ook afhankelijk van de aanwezigheid van bepaalde glycoproteïnen aan de buitenkant van de rode bloedcellen.

Andere vormen van glycoproteïnen strekken zich over het hele lichaam uit. Een voorbeeld hiervan is de hormoonset van glycoproteïnen, waaronder humaan choriongonadotrofine, dat functioneert tijdens de voortplanting, en erytropoëtine, dat helpt de rode bloedcelniveaus onder controle te houden. Verschillende glycoproteïnen kunnen ook nuttige moleculen door het lichaam vervoeren, zoals vitamines.

Het uitvoeren van bepaalde reacties is een andere functie van leden van de glycoproteïnegroep, en de drie enzymgroepen hydrolasen, transferasen en oxidoreductasen zijn glycoproteïnen. Bepaalde glycoproteïnen kunnen ook andere moleculen remmen waarvan de functie het afbreken van eiwitten is. Gebruik van glycoproteïnen bij niet-menselijke dieren omvat ook een antivrieseffect bij bepaalde vissen die in de Antarctische wateren leven. Ook keversoorten kunnen glycoproteïne gebruiken als ontsmettingslaag aan de buitenkant van het keverlichaam.