Informatie

Eenvoudig en goedkoop antigeen/antilichaampaar


Voor een toepassing moet ik een goedkoop antigeen en een goedkoop corresponderend antilichaam vinden. Het antigeen kan letterlijk elk molecuul zijn dat goedkoop is en mogelijk gemakkelijk te produceren en met een corresponderend antilichaam dat ook goedkoop en gemakkelijk te produceren is. Ik stel me voor dat dit antigeen een molecuul moet zijn dat heel gemakkelijk een immuunrespons veroorzaakt om te resulteren in een gemakkelijk te produceren antilichaam.
Ik heb nooit in de immunologie gewerkt, dus ik weet niet welk systeem antigeen-antilichaam ik moet kiezen. Ik weet dat zwangerschapstests vaak voorkomen, dus waarschijnlijk is het antilichaam voor humaan choriongonadotrofine (hCG) gemakkelijk en goedkoop te produceren, maar ik denk niet dat hCG dat is.
Zijn grotere moleculen beter dan kleinere als antigenen? Elke suggestie is nuttig.


Een goede keuze is het IgG/anti-IgG-paar voor een goedkoop, eenvoudig te demonstreren/werkbaar systeem. bijv. Geit-IgG in combinatie met ezel-anti-geit-IgG. Vrijwel elke leverancier van antilichamen heeft deze.

Dit type systemen zijn de basisbindingen van primair/secundair antilichaam die routinematig worden gebruikt bij immunoassays, blotting enz. Dit kunnen muizen-IgG zijn gekoppeld aan bijvoorbeeld een gelabeld anti-muis-IgG.

Verwijzing
Wilson MS, Nie W. Elektrochemische multianalyt-immunoassays met behulp van een array-gebaseerde sensor. Anale Chemie. 2006;78(8):2507-2513. doi:10.1021/ac0518452


Bereiding en toepassingen van antilichaam-oligonucleotide (Ab-oligo) conjugaat

​​ ​​ ​ ​​ Leer meer over antilichaam-oligonucleotide-conjugatie, de typen en toepassingen ervan en krijg toegang tot conjugatietools voor uw volgende experiment.

Antilichaam-oligonucleotide-conjugaten

​​ ​​ Antilichaam-oligonucleotide (Ab-oligo) conjugaten zijn gebruikt in tal van toepassingen, van diagnostiek tot therapie en werden ontwikkeld vanwege een onvervulde behoefte aan nauwkeurige en efficiënte detectie van eiwitten met een lage overvloed. Ab-oligo-conjugaten hebben sindsdien een belangrijke rol gespeeld bij het verbeteren van een uitgebreid scala aan biologische technieken, waaronder immunologisch en proteomisch onderzoek, ontdekking van biomarkers, klinische diagnostiek - inclusief point-of-care en andere nieuwe technieken. Antilichamen kunnen gemakkelijk worden geconjugeerd aan oligonucleotiden via hun aminozuurresiduen, waardoor ze geschikt zijn voor de meeste in vitro toepassingen, omdat ze verschillende functionele groepen hebben.​

Chemie van antilichaam-oligonucleotide-conjugatie

Amine vervoeging
Antilichamen bevatten meerdere aminogroepen (NH2), die overal kan worden verdeeld als lysine (K/Lys) zijketen epsilon-amine en N-terminale alfa-aminogroepen (zie figuur 1). Deze residuen zijn de twee die het vaakst het doelwit zijn voor conjugatie, omdat ze gemakkelijk kunnen worden gewijzigd vanwege hun sterische toegankelijkheid. Behalve aminogroepen kunnen ook glutaminezuur- en asparaginezuurresiduen worden geconjugeerd, evenals carbonzuur (-COOH) -residuen via hun C-terminale uiteinde. De talrijke functionele amino- en carbonzuurgroepen die op het oppervlak van antilichamen zijn verdeeld, betekent echter dat de gebruikte conjugatiemethode mogelijk kan resulteren in gedeeltelijk actieve/inactieve Ab-oligo-conjugaten die mogelijk niet aan het antigeen binden, dwz verminderde affiniteit, vanwege sterische hindering van geconjugeerde residuen die zich op de antigeenbindingsplaatsen bevinden.​

​​ ​​ Figuur 1. Schematische structuur van een antilichaam dat de locatie toont van functionele groepen (-NH2, -COOH en S-S) die vaak het doelwit zijn van oligonucleotideconjugatie. ​​

Sulfhydrylconjugatie

Conjugatie is ook mogelijk via een reactieve thiol (sulfhydryl) groep. Antilichamen bevatten geoxideerde sulfhydryl (-SH) groepen die aanwezig zijn als disulfide (S-S) bruggen, die bijdragen aan de tertiaire structuur van het antilichaam. Deze disulfidebruggen moeten worden gereduceerd om hun reactieve groepen bloot te stellen door een reductiemiddel (bijv. 2-ME/SDS).

Antilichamen kunnen selectief worden gesplitst om ofwel twee halve antilichaammoleculen of kleinere antilichaamfragmenten zoals F(ab')2 te creëren. Conjugatie met behulp van de 'scharnier'-regio-vrije/gereduceerde -SH-groep oriënteert ook het aangehechte oligonucleotide weg van de antigeen-bindende regio's, waardoor sterische hindering wordt voorkomen en activiteit wordt behouden.

Koolhydraatconjugatie
Een alternatieve methode van plaatsgerichte conjugatie kan plaatsvinden bij koolhydraatresiduen, die voornamelijk in het Fc-gebied voorkomen, omdat ze minder gevoelig zijn voor sterische hinder vanwege hun afgelegen ligging van antigeenbindingsplaatsen. Voor conjugatie via deze complexe methode moet de koolhydraatgroep worden geoxideerd tot een aldehyde (-CHO) met behulp van perjoodzuur. Een voordeel is dat Ab-oligos geproduceerd via plaatsspecifieke conjugatietechnieken duidelijke voordelen hebben voor in vivo toepassingen.

Toepassingen van antilichaam-oligonucleotide-conjugaat

Immuno-polymerase kettingreactie (immuno-PCR)
Immuno-PCR is een krachtige techniek die vergelijkbaar is met een ELISA, omdat een antilichaam wordt gebruikt om een ​​specifiek antigeen (analyt) uit een mengmonster te detecteren en te kwantificeren. Bij immuno-PCR bindt het Ab-oligo-conjugaat zich echter aan de geïmmobiliseerde analyten, gevolgd door amplificatie van het aangehechte DNA met behulp van RT-PCR (zie figuur 2).

Het gebruik van Ab-oligo-conjugaten in immuno-PCR biedt een zeer gevoelige methode voor eiwitdetectie en -kwantificering, die aanzienlijk superieur is aan een standaard-ELISA, omdat het zowel de detectiespecificiteit van een antilichaam combineert met de nucleïnezuurdetectiegevoeligheid van RT-PCR . De koppeling van immunodetectie aan RT-PCR is al meer dan 20 jaar een standaardtechniek.

Vanwege het enorme amplificatievermogen, de specificiteit en de verhoogde gevoeligheid die door immuno-PCR wordt gegeven, zijn lagere detectielimieten beschikbaar, die de ELISA 100- tot 10.000-voudig overtreffen. Producten die voortkomen uit amplificatie kunnen vervolgens worden gevisualiseerd met behulp van gelelektroforese, zodat de aanwezigheid van gebonden analyten kan worden vastgesteld.​

Figuur 2. Schematische weergave van de immuno-PCR-benadering.

​​Proximity ligatie-assay
Proximity ligation assay (PLA), ontwikkeld door Fredriksson et al., wordt gebruikt voor gelokaliseerde detectie, visualisatie en kwantificering van een enkel eiwit of eiwit-eiwit-interacties in hechtende cellijnen, cytospinpreparaten of weefselmonsters (inclusief ingevroren of in paraffine ingebedde ).

Deze techniek maakt gebruik van twee Ab-oligo-conjugaten die dichtbij (30-40 nm uit elkaar) zijn gebonden aan verschillende epitopen van hetzelfde eiwit, of twee eiwitten in een complex. De cellen/weefsels moeten worden gefixeerd met een fixeermiddel dat geschikt is voor de antilichamen die in het protocol worden gebruikt. Indien nodig moeten ook antigeenophaling en antilichaamspecifieke blokkering worden uitgevoerd.​

​​Figuur 3. Directe en indirecte PLA-technieken. De directe methode maakt gebruik van antilichaamparen met primaire conjugatie en de indirecte methode maakt gebruik van secundaire antilichaamconjugaten.

​Er bestaan ​​twee verschillende methoden voor PLA: direct en indirect (zie figuur 3). De directe primaire methode maakt gebruik van Ab-oligo-conjugaten en de indirecte methode maakt gebruik van ongemodificeerde primaire antilichamen die worden gedetecteerd met secundaire Ab-oligo-conjugaten. Bij beide methoden worden twee extra 'connector'-oligonucleotiden geïntroduceerd en geligeerd aan de Ab-oligo, wat leidt tot de vorming van een cirkelvormig, enkelstrengs DNA-molecuul.

Een van de Ab-oligo-conjugaten dient als een primer voor rolling circle-amplificatie (RCA) van de enkelstrengs DNA-cirkelsjabloon. Wanneer DNA-polymerase wordt toegevoegd, wordt een lang product gevormd dat covalent gehecht blijft aan een van de PLA-probes. Wanneer RCA compleet is, maken meerdere herhalingen van dezelfde sequentie hybridisatie door vele detectie-oligonucleotiden voor microscopische kwantificering mogelijk.

Elektrochemische nabijheidstest
De elektrochemische nabijheidstest (ECPA) is een eenvoudige scheidings-/wasvrije, elektrochemische vorm, gebaseerd op het huwelijk tussen het concept van de nabijheidstest en elektrochemische detectie. ECPA produceert een directe uitlezing die geschikt is voor zeer gevoelige (laag femtomolaire (fm) bereik) en selectieve kwantificering van een breed scala aan eiwitdoelen.

Figuur 4. Schema van de principes van ECPA.

EPCA gebruikt het nabijheidseffect van twee Ab-oligo-conjugaatprobes gebonden aan een eiwitdoelwit om een ​​elektrochemisch actief label - methyleenblauw (MB), dichter bij een gouden elektrode met een voorgemonteerde monolaag van gethioleerd DNA / concurrent te brengen (Figuur 4). In aanwezigheid van het eiwitdoelwit wordt de redoxstroom in ECPA gekwantificeerd met behulp van blokgolfvoltammetrie (SWV) en blijkt deze direct af te hangen van de concentratie van het doel. ECPA kan nuttig zijn voor elk eiwit met beschikbare antilichaamparen.​

Ontwikkeling van multiplex-assays
Multiplex eiwitdetectie helpt de gelijktijdige meting van meerdere analyten van belang over meerdere monsters, kwantitatief met behulp van universele capture-technologie, waardoor workflow- en monstervolumeproblemen worden verminderd. Deze detectiemethode is echter eerder beperkt door factoren zoals testspecificiteit, gevoeligheid en doorvoer (zie figuur 5).

​​Figuur 5. In een conventionele immunoassay beperkte kruisreactiviteit als gevolg van niet-specifieke binding van antilichamen de mate van mogelijke multiplexing die beschikbaar was.

​​Er worden doorgaans verschillende methoden gebruikt voor multiplex-immunoassays, die losjes in twee categorieën passen: immobilisatie op een vast oppervlak, waarbij de assays voor elke analyt ruimtelijk gescheiden zijn, of immobilisatie op kralen of deeltjes, waarbij de assays voor elke analyt zijn op een andere kraal/deeltje. Multiplex-eiwitdetectietechnologie maakt nu gebruik van de specifieke binding tussen twee complementaire DNA-strengen, met één streng (analyt) voor elk verwant geïmmobiliseerd op een vaste drager, bijvoorbeeld een microtiterplaat. De Ab-oligo-conjugaten worden samengevoegd en gehybridiseerd met hun specifieke geïmmobiliseerde capture-oligo's in het putje om een ​​antilichaamarray te creëren (zie figuur 6).

​ ​ ​​ ​ Figuur 6. Kruisreactieve binding wordt niet gedetecteerd omdat alleen overeenkomende oligoparen worden gedetecteerd en gerapporteerd (bijv. 3A+3B).​

Onze technologieën en diensten voor gemakkelijke vervoeging van Ab-oligo

Voorheen waren de standaardchemie en -methoden die werden gebruikt om oligonucleotiden aan antilichamen te koppelen moeilijk, tijdrovend en vereiste deskundige wetenschappelijke kennis van chemische modificatietechnieken. Tegenwoordig zijn er ongecompliceerde, efficiënte en hoogrenderende technologieën ontwikkeld voor de snelle en gemakkelijke bereiding van Ab-Oligo-conjugaten.

Oligonucleotide conjugatie technologie
Onze oligonucleotide-conjugatiekit (ab218260) vergemakkelijkt de eenvoudige en snelle conjugatie van antilichamen aan oligonucleotiden, met een hoge terugwinning van materialen en een superieure opruimprocedure. De kit is snel en eenvoudig te gebruiken en overwint tijdrovende en langdurige protocollen die doorgaans worden geassocieerd met standaard conjugatiemethoden (zie afbeelding 7).

Kenmerken en voordelen van de Oligonucleotide-conjugatiekit:

  • Snel en gemakkelijk te gebruiken, slechts 30 minuten activering van antilichamen en oligo's en oligo-conjugatie van 1 uur, waardoor u tijd bespaart zonder dat er deskundige wetenschappelijke kennis nodig is
  • ​Robuuste en flexibele opruimprocedure (werkt met antilichaamfragmenten en andere eiwitten)
  • Hoge niveaus van antilichaam- en oligo-terugwinning stellen u in staat kostbare reagentia te besparen
  • Unidirectionele chemie elimineert het risico van verknoping
  • Covalente binding vormt zeer stabiele conjugaten
  • Geschikt voor enkelstrengs oligo's van 10-120 basen, dubbelstrengs oligo's tot 80 basenparen, dekt daarom de meeste sequenties
  • Linking chemie werkt aan zowel het 5'- als het 3'-uiteinde en biedt de mogelijkheid om te combineren met andere modificaties.

​​ Figuur 7. Het Ab –o ligo-conjugatieproces. Het Ab-oligo-conjugatieprotocol bestaat uit drie hoofdstappen: activering van zowel het antilichaam als het oligonucleotide gevolgd door ontzouten, waarna de twee worden gemengd en gedurende de nacht worden geïncubeerd. Als een stap voor het verwijderen van ongebonden oligonucleotiden nodig is voor de eindtoepassing, kan dit de volgende ochtend worden uitgevoerd. Hierna is het conjugaat klaar voor gebruik.

​​De belangrijkste toepassingen voor de Oligonucleotide-conjugatiekit omvatten Immuno-PCR, PLA, ECPA, laterale flow, afgifte van siRNA-antilichamen in therapeutische toepassingen, pretargeting van kankertherapieën.

Immuno-qPCR-gegevens met de Oligonucleotide-conjugatiekit
In de bovenste grafiek wordt het aantal uitgevoerde qPCR-cycli weergegeven versus de fluorescentie-intensiteit gegenereerd door SYBR-groen met qPCR-sondes bij specifieke antigeenconcentraties (zie figuur 8). De onderste grafiek converteert deze gegevens vervolgens naar de hoeveelheid antigeen versus het cyclusnummer om berekening van een standaardcurve mogelijk te maken (zie afbeelding 9).

Figuur 8. Aantal cycli gegenereerd door SYBR green met qPCR-sondes bij specifieke antigeenconcentraties.

Figuur 9. Een monoklonaal antilichaam van muis dat specifiek is voor humaan CRP (kloon C7) werd in niet-geconjugeerd formaat gekocht bij HyTest. Het ongeconjugeerde antilichaam werd geconjugeerd aan een oligonucleotide met behulp van de Oligonucleotide-conjugatiekit (ab218260) en werd gebruikt als detectie-antilichaam in een sandwich-immuno-PCR-assay, met een polyklonaal anti-CRP-antilichaam als invangreagens. De grafiek geeft de standaardcurve weer van de hoeveelheid antigeen versus het cyclusnummer.

​ ​​De resultaten laten zien dat de test 1000 keer minder capture-antilichaam gebruikt, 100 keer minder detectie-antilichaam, en 1000 keer meer gevoeligheid biedt in vergelijking met de equivalente ELISA.

Handige tips voor het ontwerpen van oligo's bij gebruik van onze Oligonucleotide-conjugatiekit

  • De amino- of thiol-modificatie moet zich aan het 5'- of 3'-uiteinde van het oligonucleotide bevinden. Het 5'-uiteinde heeft de neiging om de voorkeurslocatie te zijn, omdat het resulteert in oligonucleotiden met een hogere zuiverheid, die op hun beurt de efficiëntie van de Ab-oligo-conjugatie enigszins verhogen.
  • ​​ Minimaliseer basisherhaling (homopolymeergebieden, bijv. CCCCCC)​​.
  • Vermijd stukken van meer dan vier opeenvolgende G-basen (GGGG), aangezien deze sequenties G-quadruplex- of kruisvormige structuren kunnen vormen, wat kan resulteren in lagere hybridisatie- en koppelingsefficiënties.

Antilichaam zuiveringssystemen

Helaas worden veel antilichamen geleverd in buffers die additieven bevatten die onverenigbaar zijn met labelingstechnologieën, waardoor zuivering een belangrijke overweging is voordat een conjugatiereactie wordt uitgevoerd. Om u te helpen, hebben we een reeks zuiveringskits ontwikkeld die een aanvulling vormen op onze etiketteringstechnologieën. Deze zijn uiterst eenvoudig en handig in gebruik en zijn zorgvuldig ontworpen als aanvulling op onze bioconjugatiekits.​


Waarom immuniseren met eiwitantigenen?

  • U hebt een antilichaam nodig dat in meerdere toepassingen werkt
  • Uw doeleiwit heeft een lage sequentie-overeenkomst met andere eiwitten, is gemakkelijk tot expressie te brengen en te zuiveren, en niet-toxisch

Superieure prestaties in deze toepassingen:

Ons populaire, toepassingsgegarandeerde MonoExpress'8482 Premium monoklonale antilichaamproductiepakket is een voorbeeld van het hoge succespercentage van eiwitantigenen door de ongekende garantie te bieden dat ten minste één kloon in uw eigen experimentele systeem zal werken. Bekijk ook onze PolyExpress'8482 Gold Plus, PolyExpress'8482 Premium en PolyExpress'8482 Premium Plus polyklonale antilichaamproductiepakketten met gegarandeerde Western-blotdetectie van immunogeenproteïne en levering 4 weken sneller dan welke andere leverancier dan ook. Bovendien bevatten alle pakketten de productie van eiwitantigeen, zodat we kunnen beginnen met alleen uw doelsequentie.


Achtergrond informatie

Geschiedenis

Aan het begin van de 20e eeuw merkte een Oostenrijkse wetenschapper, Karl Landsteiner, op dat de rode bloedcellen van sommige individuen werden geagglutineerd door het serum van andere individuen. Hij noteerde de patronen van agglutinatie en toonde aan dat bloed in groepen kon worden verdeeld. Dit markeerde de ontdekking van het eerste bloedgroepsysteem, ABO, en leverde Landsteiner een Nobelprijs op.

Landsteiner legde uit dat de reacties tussen de rode bloedcellen en het serum verband hielden met de aanwezigheid van markers (antigenen) op de rode bloedcellen en antilichamen in het serum. Agglutinatie trad op wanneer de RBC-antigenen werden gebonden door de antilichamen in het serum. Hij noemde de antigenen A en B, en afhankelijk van welk antigeen de RBC tot expressie bracht, behoorde bloed ofwel tot bloedgroep A of tot bloedgroep B. Een derde bloedgroep bevatte RBC's die reageerden alsof ze de eigenschappen van A en B misten, en dit groep werd later "O" genoemd naar het Duitse woord "Ohne", wat "zonder" betekent. Het jaar daarop werd de vierde bloedgroep, AB, toegevoegd aan het ABO-bloedgroepsysteem. Deze RBC's brachten zowel A- als B-antigenen tot expressie.

In 1910 bewezen wetenschappers dat de RBC-antigenen werden geërfd en dat de A- en B-antigenen codominant over O werden geërfd. Aanvankelijk was er enige verwarring over hoe iemands bloedgroep werd bepaald, maar de puzzel werd in 1924 opgelost door Bernsteins "drie allelmodel".

De ABO-bloedgroepantigenen worden gecodeerd door één genetische locus, de ABO-locus, die drie alternatieve (allele) vormen heeft: A, B en O. Een kind krijgt een van de drie allelen van elke ouder, waardoor zes mogelijke genotypen ontstaan en vier mogelijke bloedgroepen (fenotypes).

Nomenclatuur


Selectief fokken op natuurlijke antilichamen bij kippen

In de moderne pluimveehouderij worden grote aantallen vogels gehuisvest in hoge dichtheden. Recente veranderingen in productiesystemen en management zijn doorgevoerd met extra uitdagingen: de verandering van batterijkooien naar free roaming-systemen en de vermindering van preventief gebruik van antibiotica hebben het risico op ziekten en de verspreiding van ziekten vergroot. De kosten van ziekten in de pluimveehouderij zijn aanzienlijk en er worden momenteel verschillende ziekte-interventiestrategieën gebruikt of onderzocht. Een mogelijke strategie is om selectief kippen te fokken voor een verhoogde algemene ziekteresistentie. Algemene ziekteresistentie is echter moeilijk te definiëren. In plaats daarvan zou selectief kunnen worden gekweekt op één of meerdere indicatorkenmerken die verband houden met resistentie tegen meerdere pathogenen. Bovendien moeten indicatorkenmerken erfelijk, gemakkelijk en goedkoop te meten zijn. Natuurlijke antilichamen (NAb) kunnen een geschikte indicatoreigenschap zijn voor selectief fokken op algemene ziekteresistentie. NAb zijn antigeen-bindende antilichamen die aanwezig zijn in gezonde individuen zonder eerdere blootstelling aan het herkende antigeen. NAb hebben een breed scala aan functionele rollen: ze spelen een rol bij het handhaven van de homeostase/huishouding, het reguleren van het immuunsysteem, het voorkomen van auto-immuniteit en het verhogen van ziekteresistentie. Bovendien waren NAb-niveaus die keyhole limpet hemocyanine (KLH) binden rond de adolescentie eerder geassocieerd met overleving in legkippen en werden ze erfelijk geacht. Daarom zou selectief fokken op KLH-bindende NAb-niveaus rond de adolescentie een veelbelovende strategie kunnen zijn om de algemene ziekteresistentie van legkippen te verhogen.

De doelstellingen van dit proefschrift waren:

1) om de genetische variatie van KLH-bindende NAb-niveaus in adolescente legkippen te onderzoeken

2) om het potentieel van KLH-bindende NAb-niveaus als een indicatorkenmerk voor algemene ziekteresistentie te onderzoeken door:

a) divergent selectief fokken op totale KLH-bindende NAb-titers, en

b) het inoculeren van deze NAb-selectielijnen met aviaire pathogene Escherichia coli (APEC) en

3) mogelijke gecorreleerde selectiereacties op het immuunsysteem en op productiekenmerken onderzoeken.

1) Om de genetische variatie van KLH-bindende NAb-niveaus bij adolescente legkippen te onderzoeken, werden erfelijkheidsfactoren geschat en werden genoombrede associatiestudies (GWAS) uitgevoerd.

De erfelijkheidsgraden werden geschat in de basispopulatie van het selectie-experiment: 3.689 witte raszuivere legkippen werden gefenotypeerd rond de leeftijd van 16 weken voor totale KLH-bindende NAb-titers en voor de isotypen IgM, IgA en IgG. De erfelijkheidsgraden waren in totaal 0,12
KLH-bindende NAb-titers, 0,14 voor IgM, 0,10 voor IgA en 0,07 voor IgG. Dit betekent dat
KLH-bindende NAb zijn erfelijk en selectief fokken is mogelijk. Bovendien werden hoge positieve genetische correlaties geschat, wat betekent dat selectief fokken voor één NAb-type (d.w.z. totale KLH-bindende NAb-titers) zal resulteren in vergelijkbare reacties van de andere NAb (iso)-types.

De GWAS werden uitgevoerd met 57.636 single nucleotide polymorphisms (SNP) voor totale KLH-bindende NAb-titers en voor de isotypen IgM, IgA en IgG op 1.628 witte raszuivere legkippen van dezelfde lijn als de basispopulatie. Eén genomisch gebied was significant geassocieerd met KLH-bindende IgM NAb-titers, en in mindere mate met totale KLH-bindende NAb-titers. De regio toonde volledige dominantie en had een groot effect op IgM. Dit gebied bevindt zich op chromosoom 4 en bevat twee Toll-like receptoren (TLR). Om de gevonden associatie verder te karakteriseren, werden ook de totale antilichaamconcentratie en antilichaamconcentraties van de isotypen IgM, IgA en IgG gemeten en werden GWAS uitgevoerd. Eén genomisch gebied, hetzelfde als eerder geïdentificeerd, was significant geassocieerd met IgM-antilichaamconcentratie. Volledige sequentiegegevens van de belangrijkste voorouders van de onderzoekspopulatie maakten imputatie van de volledige genoomsequentie mogelijk voor verdere associatie: 16 kandidaatgenen werden geïdentificeerd. SNP gelokaliseerd in coderende regio's van deze kandidaatgenen werd gecontroleerd op voorspelde veranderingen in het functioneren van eiwitten. Eén SNP, een C/G-polymorfisme van 69.965.939 basenparen (Gallus_gallus-5.0), kreeg de maximale impactscore van twee onafhankelijke voorspellingstools, waardoor deze SNP de meest waarschijnlijke causale variant is. De C-variant had een allelfrequentie van 0,45, vertoonde een dominante manier van genactie en ging gepaard met hoge IgM-niveaus. De G-variant had een allelfrequentie van 0,55 en ging gepaard met lage IgM-niveaus. Deze SNP bevindt zich in TLR1A, wat suggereert dat TLR1A een fundamentele rol speelt bij de regulering van IgM-niveaus, of B-cellen, of beide.

2) Om het potentieel van KLH-bindende NAb-niveaus als indicatorkenmerk voor algemene ziekteresistentie te onderzoeken, werden a) legkippen (afkomstig uit de basispopulatie) divergent selectief gefokt op totale KLH-bindende NAb-titers, en b) twee generaties van deze NAb-selectielijnen werden geïnoculeerd met aviaire pathogene Escherichia coli (APEC).

a) Het selectiecriterium was totale KLH-bindende NAb-titers op een leeftijd van 16 weken en selectie was gebaseerd op eigen prestaties (d.w.z. massale selectie). Kippen van de basispopulatie werden geselecteerd om ofwel de Hoge NAb-selectielijn (Hoge lijn) of de Lage NAb-selectielijn (Lage lijn) te fokken. Selectief fokken werd gedurende 6 generaties uitgevoerd. Elke generatie bestond uit ongeveer 600 kippen per lijn. De gemiddelde genetische verschillen in KLH-bindende NAb-titers op een leeftijd van 16 weken namen per generatie toe met 0,36 voor totale NAb-titers (selectiecriterium), 0,40 voor IgM en 0,32 voor IgG (gebaseerd op geschatte fokwaarden (EBV)). Selectief fokken op totale KLH-bindende NAb-titers op een leeftijd van 16 weken bleek daarom mogelijk te zijn.

Interessant is dat de genetische progressie van gemiddelde titers in de High-lijn verminderde voor
KLH-bindende IgM NAb-titers van generatie 4 tot generatie 6, maar werden niet beïnvloed in de lage lijn. Dit zou het gevolg kunnen zijn van het dominantie-effect van de aanwezige TLR1A-varianten: in generatie 6 hadden de High-line vrouwtjes een C-variant frequentie van 0,64 en een G-variant frequentie van 0,36, en de Low-line vrouwtjes hadden een C- variant frequentie van 0,08, en a
G-variant frequentie van 0,92. De hoeveelheid additieve genetische variantie, gebaseerd op de TLR1A-varianten die aanwezig zijn in de NAb-selectielijnen, was lager in de High-lijn dan in de Low-lijn: dwz genetische verbetering voor hogere KLH-bindende IgM NAb-niveaus was moeilijker in vergelijking met genetische verbetering voor lagere KLH-bindende IgM NAb-niveaus. Desalniettemin blijft er voldoende variatie aanwezig om divergerend selectief fokken op NAb-niveaus voort te zetten, zelfs na zes generaties selectie.

b) Selectief fokken op KLH-bindende NAb-niveaus leidt niet noodzakelijkerwijs tot verschillen in algemene ziekteresistentie. Daarom werden de NAb-selectielijnen geïnoculeerd met aviaire pathogene Escherichia coli (APEC). APEC is een opportunistische ziekteverwekker, die vooral in de luchtwegen wordt aangetroffen. APEC veroorzaakt colibacillose en kan uiteindelijk tot de dood leiden. Het heeft verschillende antibioticaresistente mechanismen en vaccinatie is niet voldoende beschermend. APEC is daarom een ​​relevante pluimveeziekte om in overweging te nemen. Generatie 4 en generatie 6 werden intratracheaal geïnoculeerd met een van de drie doses APEC op een leeftijd van 8 dagen. De mortaliteit werd gedurende 7 dagen geregistreerd, waarna het experiment werd beëindigd. De waargenomen mortaliteit voor alle APEC-doses was 2 tot 3 keer hoger in de lage lijn dan in de hoge lijn. Bovendien bleken de overlevende kippen van 15 dagen oud van de High-lijn minder beïnvloed te worden door de infectie in vergelijking met de overlevende kippen van de Low-lijn: de morbiditeitsscores van colibacillose waren lager en het lichaamsgewicht en het relatieve orgaangewicht waren hoger . Het exacte beschermingsmechanisme dat ten grondslag ligt aan APEC-resistentie, moet echter nog worden geïdentificeerd.

3) Om mogelijke gecorreleerde selectiereacties op het immuunsysteem en op productiekenmerken te onderzoeken, werden verschillende kenmerken gemeten op verschillende leeftijden in verschillende generaties.

De NAb-selectielijnen werden tijdens het selectie-experiment op meerdere leeftijden geobserveerd voor een diverse reeks immunologische kenmerken. De hoge NAb-lijn had, vergeleken met de lage lijn, hogere KLH-bindende NAb-niveaus en andere antigeen-bindende NAb-niveaus in het algemeen, een hogere specifieke antilichaamrespons tegen humaan serumalbumine (HuSA), hogere antilichaamconcentratie, meer perifere B-cellen , en trombocyten (percentages), een hoger slijmbeursgewicht en een hoger miltgewicht. Er werden geen lijnverschillen waargenomen voor specifieke antilichaamresponsen tegen KLH, en met vogeltuberculine gezuiverd eiwitderivaat van Mycobacterium avium (PPD), perifere T-cellen, γδ-T-cellen, NK-cellen en antigeenpresenterende cellen (percentages) en levergewicht. Dit suggereert dat KLH-bindende NAb-selectie positieve gecorreleerde selectieresponsen heeft voor de meeste immuunkenmerken, en geen negatieve gecorreleerde responsen (voor de gemeten kenmerken).

Verschillende productiekenmerken werden waargenomen met betrekking tot (selectie op) KLH-bindende NAb-niveaus. Correlaties tussen KLH-bindende NAb-typen en verschillende productiekenmerken werden geschat op basis van 2.385 vrouwtjes van de niet-geselecteerde basispopulatie. Er werd een significante positieve genetische correlatie gevonden tussen KLH-bindende IgG NAb-titers en de voerconversieverhouding (FCR verbruikt voer/ei-massa geproduceerd) ( ). Bovendien werden verschillende significante, hoewel kleine fenotypische correlaties ( ) gevonden tussen KLH-bindende NAb-niveaus en sommige productiekenmerken. In de NAb-selectielijnen suggereren maandelijkse lichaamsgewichtmetingen dat de High-lijn een hogere groeicurve heeft in vergelijking met de Low-lijn. Het volwassen lichaamsgewicht verschilde echter niet tussen de NAb-selectielijnen. In generatie 5 werden geselecteerde vrouwtjes (35 weken oud) gedurende drie weken gecontroleerd op productie: de High-lijn had een hoger eigewicht en wittere eierschalen in vergelijking met de Low-lijn. De NAb-selectielijnen waren gelijk voor eierschaaldikte, eierschaalbreeksterkte en FCR. Over het algemeen leken productiekenmerken niet (sterk) negatief te worden beïnvloed door NAb-selectie, wat ruimte geeft voor gelijktijdige verbetering van KLH-bindende NAb-niveaus en productiekenmerken.

Gezien de beschikbare literatuurstudies en dit proefschrift, veronderstel ik dat KLH-bindend IgM NAb een proxy is voor de humorale adaptieve baseline-immuniteit. KLH-bindend IgM NAb toont het potentieel van het humorale adaptieve immuunsysteem van een individu. Dit betekent dat niet noodzakelijk KLH-bindend NAb, maar de IgM-concentratie, of, meer waarschijnlijk, het aantal naïeve, rustende, alleen IgM-B-cellen aanwezig in een individu, de algemene ziekteresistentie kan bepalen.

Concluderend kan worden gesteld dat selectief fokken voor totale KLH-bindende NAb-niveaus rond de adolescentie bij kippen haalbaar is en de APEC-resistentie op jonge leeftijd beïnvloedt. Gezien de beschikbare studies in de literatuur, en dit proefschrift, veronderstel ik dat selectief fokken op KLH-bindende NAb-niveaus de bacteriële ziekteresistentie verhoogt, zonder nadelige effecten op het immuunsysteem en productiekenmerken. Er is echter meer onderzoek nodig (bijvoorbeeld infectie-experimenten met verschillende pathogenen of veldexperimenten) in de NAb-selectielijnen, en in andere kippenlijnen, of kippenrassen, om dit te bevestigen en om verhoogde algemene ziekteresistentie te onderzoeken.

  • Wageningen Universiteit
  • Bovenhuis, Henk , Promotor
  • Kemp, Bas , Promotor
  • Parmentier, Henk , Co-promotor
  • van der Poel, J.J., Co-promotor

&lsquoOploskoffie&rsquo COVID-19-tests kunnen het antwoord zijn op de heropening van de VS

Nu de economie inzakt, de werkloosheid omhoog schiet, scholen hun deuren dichtslaan en de Big Ten- en PAC-12-conferenties het herfstvoetbal annuleren, is Amerika een land dat gisteren op zoek is naar een antwoord op COVID-19. En misschien is er een beschikbaar en je kunt oploskoffie aan in plaats van espresso.

De koffie-analogie wordt gebruikt door Michael Mina, assistent-professor epidemiologie aan de Harvard T.H. Chan School of Public Health, en het is bedoeld om het functionele verschil te beschrijven tussen twee benaderingen van snel testen op het virus. In dit geval makkelijk en goedkoop&mdashoploskoffie, dat is misschien wel beter.

&ldquoDit is het belangrijkste potentiële hulpmiddel dat vandaag zou kunnen bestaan,&rdquo, zei Mina in een recent interview. &ldquoWe hebben vrijwel een andere manier&helip om de overdracht door de gemeenschap te stoppen als er geen vaccin is&mdashand ligt het recht voor ons.&rdquo

Dagelijks of bijna dagelijks testen kan de sleutel zijn tot het openen van onze samenleving, en dat komt neer op het algemeen beschikbaar en betaalbaar maken van de tests. Als je de mogelijkheid had om jezelf 's ochtends te testen door in een buisje te spugen (of je neus schoon te vegen) en 15 minuten te wachten op de resultaten, en als het je niet meer dan een paar dollar zou kosten, zou je dan die kans grijpen?

Mina verdeelt de bestaande tests in twee kampen. &ldquoEspressokoffie&rdquo-tests zijn reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR)-tests of luxe antigeentests, en verschillende fabrikanten, zoals Mesa Biotech, Quidel en Becton, Dickinson, hebben al een Emergency Use Authorization (EUA) gekregen van de Food and Drug Administration (FDA). Deze tests zijn zeer gevoelig, vereisen een machine om de resultaten te produceren en zijn duur en variëren van $ 30 tot $ 150 per test. Ze kunnen ook langere doorlooptijden hebben, zelfs Yale University's SalivaDirect, die zojuist EUA heeft ontvangen op 15 augustus en slechts ongeveer $ 10 kost, moet worden ingediend bij en verwerkt door een centraal laboratorium.

In schril contrast staan ​​de "oploskoffie" snelle antigeentests op papier, waaronder een gemaakt door E25Bio en een in ontwikkeling door 3M en MIT. Dit zijn snelle, eenvoudig te gebruiken tests voor thuis, en sommige zijn erg goedkoop: ongeveer $ 1 tot $ 5 per test. Ze worden laterale flow-assays genoemd, maar het zijn duidelijk papieren strooktests met een antilichaam ingebed op filterpapier. Als in een speekselmonster coronavirus aanwezig is, zal het antilichaam dat virale antigeen binden, waardoor de test positief wordt, net zoals een zwangerschapstest werkt. Though the tests have much lower sensitivity than PCR tests overall, one advantage they have is that they do not detect leftover, inactive viral RNA particles, which may be present days to weeks after a person is infectious.

Here&rsquos the key: What is more important than a perfect test is one that turns positive during the time period in which an individual can spread the virus to others&mdashand that&rsquos, purportedly, what these cheap tests do well. Generally, disease transmission in COVID-19 is believed to begin early&mdashseveral days before one becomes symptomatic. Viral load levels peak early and then they gradually decline, with an individual unlikely to be infectious approximately eight to 10 days after showing symptoms.

Though efficacy needs to be better proven, these antigen tests are efficient at detecting virus at high viral loads. When they are used frequently during this period of infectivity, Mina believes their sensitivity and performance would far exceed that of a single PCR test. At any rate, Mina and his colleagues have demonstrated in their statistical models that public health surveillance depends much more on frequency of testing and rapid reporting of results than it does on the comparative sensitivity of the tests themselves.

If everyone made use of such an affordable alternative, we could very quickly get this pandemic under control. A positive COVID-19 test would mean the individual stays home a negative test would mean he/she goes to work, or school or practice, or to shop or dine. Under this approach, the prevalence of the virus in the community would drop considerably&mdashand contact tracing wouldn&rsquot be needed, because everyone would already be doing the testing.

Like almost everything connected with our effort to control COVID-19, the research related to this rapid-test system is not perfect. Mina and his colleagues acknowledged several important limitations to their study, among them potential manufacturer variations in testing characteristics, improper clinical sampling, possible assumptions made related to viral kinetics and perhaps an erroneous belief that everybody would participate in such a plan.

But the bigger problem may be finding the tests at all. Why haven&rsquot we seen them in the drug stores? The answer is that the FDA is holding developers of these tests, like E25Bio, to the same high sensitivity standards as those required for molecular grade diagnostics. Without being granted an EUA, the companies are not manufacturing the tests. Mina and others argue that a paradigm shift is needed, so that rapid antigen tests are recognized as a &ldquopublic health tool," which when combined with frequent use, will identify infectious individuals.

It will likely take placing the full weight of the federal government (or someone of influence, like Bill Gates) behind these companies in order to shore things up, further vet the test&rsquos accuracy during the window of infectivity, solve regulatory issues and rapidly ramp up production, so that 50 million to 150 million tests could be performed by Americans each day. Given how low-tech the strips are, such mass production should be feasible.

This type of frequent, low-cost surveillance testing of people at home&mdashespecially while they&rsquore asymptomatic&mdashwould go a long way toward helping contain our current outbreak . This could be the key we have all been looking for to unlock our front doors and get back to business&mdashor pleasure.


Difference Between Antigens and Antibodies

Antigens vs Antibodies

Antigen comes from the root term antibody generator and is an organic substance that initiates the creation of antibodies thereby bringing about a prompt immunity retort. On the other hand, antibodies which are also termed as immunoglobulins comprise of gamma globulin proteins that are contained in the various body fluids and the blood stream in all vertebrates. Antibodies essentially make use of the immune system to recognize and fight foreign elements that can cause harm to the system like viruses or bacteria.

Antigens are made of either polysaccharides or proteins. This may contain components like cell walls, capsules, flagella, toxins or fimbrae of viruses, bacteria and other microorganisms. On the other hand antibodies are made of organic structural units including a couple of large heavy chains and a couple of small light chains. Antibodies develop from plasma cells in the blood.

The purpose that the antibody serves is that it is produced by the body in order to bind and thereon render all foreign particles into an inactivated state in the body. When the entire process of binding goes unhindered the antibody manages to bind specifically the particular antigen in question. The particle that is formed in the process is called the antigen. Antigens on the other hand precisely serve the purpose of stimulating a state of alertness in the body initiating immediate immune response. So the basic difference between an antigen and an antibody is that the emergence of the former leads to the production of the latter, both functioning in an antagonistic organic process to each other. Antibody is the particular protein purposely produced to counter a specific antigen.

There are five basic kinds of antibodies,

  1. Immunoglobulin M
  2. Immunoglobulin G
  3. Immunoglobulin E
  4. Immunoglobulin D
  5. Immunoglobulin A

Now coming to antigens, there exist three primary kinds of professional antigen cells including,

  1. Dendritic Cells
  2. Macrophages
  3. B-cells

Other than these three there is another distinctive kind of antigen called the T-independent antigen.

Antibodies are always Y-shaped with a difference in the higher branch. This is due to the structural difference existing amongst the amino acids in the antibodies that help in exact antigen recognition. On the other hand the antigen has a surface that acts as the binding site for the antibody. Once combined by the y branches of the anti body, the antigen gets destroyed.

Samenvatting:
1. Antigen is an organic substance that initiates the creation of antibodies, whereas antibodies make use of the immune system to recognize and fight foreign elements.
2. There are five basic kinds of antibodies and three basic kinds of antigens.
3. Antigens are made of either polysaccharides or proteins. Antibodies, on the other hand, are made of organic structural units.


How does an antigen test work?

Antigen tests are well named: They look for antigens. To identify these antigens, antigen tests use antibodies.

You may have performed one yourself if you’ve ever used a home pregnancy test, which uses tests for an antigen called human chorionic gonadotropin in urine that is produced by the cells that surround a fetus when a woman becomes pregnant.

Like the test that diagnoses influenza, the SARS–CoV–2 antigen test uses antibodies that are produced in animals to hunt for proteins embedded in the coronavirus’s surface. If the antibodies detect viral proteins in a sample, the person most likely has the coronavirus.

An antigen test for SARS-CoV-2 starts with a medical professional collecting a sample of mucus from the back of a persons throat or nose using a swab. They then dip the swab into a liquid to dissolve the mucus and release the virus.

The liquid is then applied to the surface of the test slide that is coated with antibodies. These antibodies are stuck to the slide and “grab onto” any coronavirus proteins that are in the sample.

A second mixture of antibodies is then applied to the slide. These antibodies have been chemically modified with a dye that makes them visible to the naked eye or detectable by fluorescent light.

If the sample contains viral antigen proteins, those antigens are now sandwiched by two antibodies: one that attaches them to the test kit and another that makes them visible. The more coronavirus antigen there is, the more dye will be visible, indicating that the patient is infected with SARS-CoV-2.

If there is no detectable dye, this would mean the person does not have SARS-CoV-2 or that the sample did not have enough viral proteins.

Evolution is the greatest engineer in history. By using the immune system itself to search for evidence of a SARS-CoV-2 infection, antigen tests are much faster than normal RNA tests. Antibodies (in blue) binding to a surface protein of SARS-CoV-2 (red). Juan Gaertner/Science Photo Library via Getty Images


The "Lunchbox" Immunoabsorbent Technique

I have explored the possibilities of using nitrocellulose and other adsorptive membranes as immunoadsorbents for simple, reliable "low tech" procedures for the purification of a specific antibody. The technique does not require the prior fractionation of an antigen mixture by electrophoresis, and requires only very basic laboratory equipment, including nitrocellulose membrane, simple benchtop centrifuges, a plastic freezer container or "lunch box," and some form of simple immunoassay system. The suitability of the method for the small-scale preparation of antibodies for immunoassays such as ELISA, immunodot blot, and western blotting, is discussed.

Another techniques page will cover the specific absorption of Ab to, and elution from, electrophoretically-purified proteins ( Monospecific Ab Production ).

Inhoud

Nitrocellulose paper (0.45um pore Schleicher and Schuell) is cut into 10 x 10 cm squares, which fit into 12.5 x 17 x 8 cm plastic freezer boxes ("lunchboxes") with room for movement during shaking. Other membranes such as polyvinyllidene difluoride (PVDF, Millipore) or other nylon based material can also be used (E.P. Rybicki, unpublished). I have used crude Brome mosaic virus (BMV) preparations to make monospecific antibody preparations: semipurified virus was made by resuspension of centrifugally pelleted clarified plant extract in O.1M phosphate pH 7.0 (1/10 original volume) and used to coat nitrocellulose. This sort of extract contains a large amount of plant proteins, including cell wall and membrane components. I and others in the lab have used a variety of other crude preparations, including E coli preparations with foreign proteins, with great success. In de E coli case, a sonicated soup or French-pressed mush works fine.

Water-wetted nitrocellulose is added to ± 25 ml volume of extract, and the boxes agitated at room temperature (22oC) for at least 2 hours. Alternatively, the boxes are left on the bench and agitated by hand every 10 min. It does not appear necessary to "fix" antigen to the membrane by heat or other treatment.

Membranes are washed in 3x changes of saline containing 0.05% (v/v) Tween-20 or Triton X-100 for 5 min, then "blocked" overnight using 20 ml phosphate-buffered saline (PBS) containing 0.05% Tween or Triton and 2% (w/v) bovine serum albumin or 1-5% (w/v) skimmed milk powder (blocking buffer).

Sera to be absorbed are diluted - depending on titre, pre-tested using a simple precipitin assay - in saline/detergent, and 20 ml added to a drained blot of healthy plant extract (made exactly as for the virus blot, above) in a freezer box. The box is agitated at room temperature for 2 hours, and the serum then poured off. This is also a useful way to absorb serum dilutions immediately prior to their use in western blottests.

Appropriately diluted absorbed serum is added to a drained virus extract blot in a freezer box. This is incubated at 37 o C (or at room temperature) for 1-2 hr with shaking. The blot is then washed as above, with a final rinse in water.

Bound antibodies are eluted using about 20 ml of a 0.1 M glycine/HCI, buffer, pH 2.9. The box was agitated for 10 min, the liquid drained off and immediately neutralized by addition of a predetermined amount of 0. 1 M NaOH. Essentially all specifically bound antibody may be removed from a blot by a single elution (Rybicki, 1986 and unpublished), with yields of up to 1 mg for BMV extracts. The antibody attachment and elution steps may be repeated up to three times with the same BMV-infected sap blot with only slight drop in yield, as long as a fresh dilution of serum is used each time (E.P. Rybicki, unpublished).

Antibody preparations are concentrated by dialysis against water and lyophilisation. Preparations are resuspended in small volumes of saline.

Antibody preparations may be tested for specific activity by indirect ELISA (eg: Rybicki and von Wechmar 1981) and western blotting (eg: Rybicki and von Wechmar 1982). An example of a blot - taken from the source reference below - is shown here:

As mentioned above, 1 mg or more antibody can be prepared from a single elution of a single BMV-infected sap extract-coated membrane this is sufficient to prepare enzyme conjugates for DAS-ELISA, and would provide materials for many assays. In any case, re-use of the antigen-coated membrane enables accumulation of enough antibody to allow many serological tests. If antisera are absorbed with host plant antigens prior to application to blots, eluted antibodies react almost exclusively with virus coat protein, with very little "background" reaction with other polypeptides in Western blot tests (see Figure). Eluted anti-BMV antibody could be diluted by a factor of 1/50 for use in Western blots, and up to 1/500 for indirect ELISA. This is a far better yield than can be obtained with individual excised polypeptides.

An important consideration is that cheap materials may be used. Nitrocellulose or other membrane is the only expensive component, and that is far cheaper, far easier to use, and far better as an adsorbent than CNBr- Sepharose, or other comparable column chromatography materials commonly used as immunoadsorbents. Up to 100 ug protein/cm2 may be adsorbed onto nitrocellulose polyvinyllidene fluoride's capacity is even higher.

The use of crude extracts to purify antibodies is important when no facilities exist for purification of low-yielding viruses: clarified sap extracts could be concentrated by PEG treatment non-infected extracts could be used to absorb antisera and infected extracts to purify monospecific antibodies. Even if antibody preparations are not exactly monospecific, their preparation in this way represents an important purification and concentration step, as relatively specific antibodies are purified in one step from raw serum, with a consequent increase in activity of the preparation once most of the extraneous serum proteins and immunoglobulins are removed.

This has worked very sucessfully with detection of plant virus coat protein bands against a background of whole plant, using antisera that reacted with EVERYTHING before absorption also with antisera raised against purified proteins either from, or cloned into, E coli: in latter case, as anyone who has done it knows, when you do a Western, ALL the bands light up, as rabbits are immune to E coli and related gut microflora - and no-one thought to tell you.

You can use the same technique to mass-absorb / elute Ab to a particular purified protein, without having to go to the trouble of making up an expensive column immunoabsorbent: soak NC or other memb in protein of interest, wash, block, soak in AS. Wash thoroughly, then elute Ab with preferred elution mix (I use 0.1M Glycine/HCl/0.15M NaCl pH 2.9). You can repeat the absorption/elution several times, and yield is quite high - certainly enough for labelling specific Ab for immunofluorescence, ELISA, etc. We have used it in our labs to make monospecific Ab to plant viruses, and to E coli proteins or proteins cloned in E coli, as long as one has a background free of the protein of interest.

You can also combine two techniques: pre-absorb antisera with membrane with complex mixture NOT containing protein of interest, then pour off antisera onto memb with complex mixture CONTAINING protein of interest, preferably at highish concentration. First absorption takes out Ab reacting with "host protein", in second, what is left is hopefully relatively monospecific, and can be eluted as above, for labelling, etc.

Very simple, very easy, VERY CHEAP. - and originally published here:

Source Reference:

Monospecific antibody preparation for use in the detection of viruses. pp. 149-153 in "World Perspectives on Barley Yellow Dwarf" (PA Burnett, ed.) CIMMYT, Mexico DF, Mexico.


Cheap and easy $1 coronavirus test to undergo trials in Senegal

TRIALS to develop a $1 covid-19 testing kit that produces results in less than 10 minutes are under way in Senegal. If it works, the test could be a vital tool in sub-Saharan Africa.

Researchers at DiaTropix, an infectious disease testing facility run by the Pasteur Institute in Dakar, are working alongside UK-based company Mologic to manufacture the diagnostic kits.

The prototype is similar to a home pregnancy kit and can be used either to detect current infections through saliva antigens or previous infections by blood antibodies. The institute says it could be rolled out next month if the trials show it works well enough.

Advertisement

Amadou Sall, director of the Pasteur Institute in Dakar, said that 500 to 1000 tests a day could be analysed at the facility and that up to 4 million could be made annually. “There is no need for a highly equipped lab,” he says. “It is a simple test that can be done anywhere.”

Most coronavirus tests use a technique called polymerase chain reaction, or PCR, to detect sequences of viral RNA. Each test costs hundreds of dollars and takes several hours to process using sophisticated equipment. The team behind the new pocket-sized test say it would be much cheaper and easier to distribute across sub-Saharan Africa.

“Existing systems are not fit for purpose,” says Joe Fitchett at Mologic. Testing regimes that are decentralised and not required to turn a profit are essential to addressing covid-19 and future pandemics, he says.

“There is no need for a highly equipped lab. This simple test can be done anywhere”

Justine Davies, a global health researcher at the University of Birmingham, UK, says the tests could allow some economic activity to continue in the region while reducing the burden on Africa’s limited health services. “If it is properly validated and found to be reliable, then it could have major positive impacts, allowing contact tracing and limiting the spread of the virus,” she says.


Can I get one?

The Quidel test is not currently widely available due to production capacity. As production ramps up and other companies begin to produce antigen tests, they will become more available. Once laboratories around the country begin processing the antigen tests, public health officials will also get a better sense of the real-world false negative rate.

A COVID-19 antigen test can fill an important gap in the testing landscape by providing fast diagnoses in the clinic, but they’re not perfect. Because of the somewhat high false negative rate, individual patients should be careful with how they interpret the results. But when combined with more accurate PCR tests and blood tests that look for antibodies, antigen testing has a large role to play in helping public health officials better understand and fight the spread of the coronavirus.

[Understand new developments in science, health and technology, each week. Subscribe to The Conversation’s new science newsletter.]

Eugene Wu, Associate Professor of Biology and Biochemistry, University of Richmond

This article is republished from The Conversation under a Creative Commons license. Lees het originele artikel.


Bekijk de video: Corona zelftest Joinstar spuugtest (Januari- 2022).